牛奶中左旋咪唑残留量测定的前处理方法

左旋咪唑的危害及检测目的

       左旋咪唑作为一种广谱型抗线虫药，药源丰富，被广泛应用于畜禽养殖企业，效果良好。但不合理地使用左旋咪唑会造成动物产品中残留，研究表明，人体摄入过量左旋咪唑可引起畸变、癌变等症状，严重危害人类健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最 大残留限量》中明确规定了左旋咪唑在动物靶组织中的残留限量，并且规定泌乳期和产蛋期禁用。

       本文阐述了如何将左旋咪唑从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成高/效液相色谱仪可以检测的形式。以提取、净化为重/点，依据国标GB 29681-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：左旋咪唑

应用范围：牛奶

GX液相色谱法

方法原理：试料中残留的左旋咪唑，用碳酸盐缓冲液和乙酸乙酯溶液提取，C18柱净化，甲醇洗脱，GX液相色谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；均质机；冷冻高速离心机；电热恒温水浴锅；旋涡混合器；茄形瓶（50 mL）；离心管；滤膜（0.45 μm）。

检测仪器： HPLC-PDA 

试样的制备与保存

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料；

取均质后的空白样品，作为空白试料；

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试料5 g± 0.05 g，于离心管中，加碳酸盐缓冲液5 mL，加乙酸乙酯10 mL，混匀，6000 r/min离心10 min，取上清液于茄形瓶中，再加乙酸乙酯10 mL萃取一次，合并两次上清液，于50 ℃水浴旋转蒸发至干，加碳酸盐缓冲液5 mL溶解残余物，备用。

2.净化

C18柱（3 mL/500 mg）依次用水3 mL、甲醇3 mL和碳酸盐缓冲液3 mL活化，取备用液过柱，用水3 mL淋洗，用甲醇5 mL洗脱，收集洗脱液，于50 ℃水浴氮气吹干，用流动相1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供GX液相色谱测定。

国标解读及注意事项

1.左旋咪唑用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃保存，可使用3个月。

2.本方法使用碳酸盐缓冲液提取，乙酸乙酯萃取，C18固相萃取柱净化的方式进行目标化合物的提取净化。

3.本方法采用两次萃取的方式，提高目标化合物的回收率。

4.为保证固相萃取净化效果，过柱时需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下。水淋洗后完全抽干小柱，再进行洗脱。

5.左旋咪唑也可以使用液质联用仪进行检测，同时添加相对应的盐酸盐同位素内标，进行回收率的校正。

参考文献

GB 29681-2013 食品安全国家标准 牛奶中左旋咪唑残留量的测定 GX液相色谱法