DNA退火缓冲液（5x）

产品简介

Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)，即DNA寡核苷酸退火缓冲液，该退火缓冲液不仅可以用于常规DNA Oligos的退火，而且特别适合于较难退火的构建RNAi（siRNA和shRNA）质粒的DNA Oligos，可以有效避免DNA Oligos自身形成发夹结构，并且两条Oligos退火后可以直接和经酶切纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。

保存条件

常温配送。一个月内，4 ºC保存。-20 ºC长期保存，至少1年有效。

注意事项                                                                                                

1．DNA退火缓冲液（5×）只适合于DNA Oligos的退火，不能用于RNA Oligos的退火。

2．本产品仅用于科学研究，不得用于临床，不得用于食品和药品，不得存放于普通住宅内。

3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

1．溶解Oligos：

(1) 方法一：用双蒸水将DNA退火缓冲液（5×）稀释成1×。→ 将Oligos干粉用1× DNA退火缓冲液配制成20 µM。 → 取等体积DNA Oligo A和DNA Oligo B混匀。

(2) 方法二：将Oligos干粉用双蒸水配制成50 µM。 → 配置如下退火反应体系，混匀。

Note：Oligos的浓度根据实验要求进行调整。

2．退火：

(1) 方法一：将退火反应体系置于PCR仪中，设置反应条件：95℃变性2 min，-1℃/30s/cycle缓慢降温至25℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为：1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70×; 4. 4℃, ∞。

对于易形成发卡结构的Oligos可以延长时间降温时间：95℃变性2 min，-1℃/90s/cycle缓慢降温至25℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为：1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70×; 4. 4℃, ∞。

(2) 方法二：将退火反应体系放于95°C水浴锅，持续2 min，后将退火反应体系置于一杯1 L，95°C的水中，让其自然冷却至室温。若是易形成发卡结构的Oligos，可以将95°C水放于保温杯中开盖降温。

Note：缓慢降温对形成正确的结构是非常有帮助的，降温过快将导致错误高级结构的产生。

3．退火结束后可直接用于连接反应，也可以-20ºC冻存备用。若进行酶切等其它反应，可用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免退火缓冲液对后续酶反应体系的干扰。

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