GX液相色谱柱切换法测定血液及腹腔液中5-氟尿嘧啶的

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

GX液相色谱柱切换法测定血液及腹腔液中5-氟尿嘧啶的浓度；
评价GX液相色谱柱切换法在测定体液中5-氟尿嘧啶(5FU)浓度的优点方法：GX液相色谱柱切换法测定血及腹腔液中5FU浓度结果：标准曲线的回归方程为Y=9.69×10-6X-1.33,r=0.999 8,P＜0.000 1；体液测定5FU浓度的RSD为0.2%～5.6%，但是浓度小于或等于0.05 g.mL-1时，RSD为15.7%体液中5FU的回收率为88.87%～116.8%测定的Z小浓度为0.05 g.mL-1结论：GX液相色谱柱切换法有样品处理简捷快速，灵敏度高，重复性好等优点；在临床药物监测时，可以起主要的作用
关键词5-氟尿嘧啶GX液相色谱柱切换法体液

在胃肠道恶性肿瘤辅助化疗中，5-氟尿嘧啶(5FU)被公认为效果较好的药物［1，2］其临床给YF式较多，外周静脉注射，门静脉注射，肝动脉注射，腹腔注射，口服，灌肠等各临床医院以经验为根据选择某种给YF式用药的量及注射药物的速度也同样缺少实验根据为了确定各给YF法的优点及其可行性，研究各种给药途径及不同药量的药代动力学特点对指导临床用药有重要的意义
对5FU的测定报道有GX液相色谱法［3～5］但较为繁琐为此我们建立了GX液相色谱柱切换法，不经提取，直接测定血液及腹腔液中的5FU浓度本法具有样品处理简捷快速，灵敏度高等优点特别适应于临床血液及其他体液药物浓度的监测及药代动力学研究
1仪器与试药
GX液相色谱泵：SP8810，Spectra Physics,USA；可变波长紫外线检测仪：Spectra 200,Spectra Physics,USA；数据处理机：Data jet integrator,Spectra Physics,USA
5FU标准品：由Sigma公司提供；10%高氯酸及磷酸二氢钠：AR级，北京化工厂；去离子水：Millipore-Q
2色谱条件
色谱柱：YWG-C18柱(4.6 mm×250 mm)，北京分析仪器厂；保护柱：Waters Gaund-PAKTM；流动相：0.05 mol.L-1磷酸二氢钠；流速：1 mL.min-1；紫外检测波长：256 nm；室温下操作
仪器操作方法：用六通阀连接3个色谱柱先用被测物的标准品测知其流经**色谱柱的保留时间根据已知的保留时间，再将小段携有样品峰的流动相切换到第二色谱柱上进一步分离并检测六通阀在标准品保留时间前后40 s切换
3标准液的配制
精密称取5FU标准品50 mg于50 mL容量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，配成浓度为1 000 g.mL-1的5FU溶液取该液分别配成0.05，0.1,0.2,1.0,2.0,6.0,10,20,40,80,100,500 g.mL-1系列浓度的5FU标准液
4血及腹腔内液标本的处理
静脉取血，静置至开始出现血凝现象，用小塑料棍稍微搅拌后，离心5 min(离心力=133×g)取血清0.5 mL，分2次加10%高氯酸0.1 mL每次加后，旋涡混合机中振动5 min，再次离心5 min(离心力=133×g)取上清液经过0.45 m微孔滤膜滤过取20 L进样
腹腔液的处理同血液
5结果与讨论
5.15FU色谱图5FU标准品以及未经5FUZL的血清添加5FU标准液经过处理后，分别用单柱法及柱切换法HPLC测定的色谱图见图1及图2

图15FU标准品的色谱图
A.单柱法B.柱切换法
1. 5FU

图2血清中添加5FU的色谱图
A.单柱法B.柱切换法
1. 5FU

5.2线性关系取不同浓度的5FU标准液20 L，进样以峰面积对浓度作图，绘制标准曲线得出的回归方程为：

Y=9.69×10-6X-1.33r=0.999 8

P＜0.000 1，因此可知5FU浓度在0.05～500 g.mL-1呈线性关系
5.3回收率试验取血清0.45 mL，分别加入不同浓度的5FU标准液50 L，配成5FU 1，10，50，100 g.mL-1的血清液经过上述样品处理方法处理后，取20 L进样1种浓度作3份平行样品腹腔液的处理同血清结果血清中5FU的回收率为88.87%～116.8%，RSD＜10.8%；腹腔液中5FU的回收率为96.22%～115.6%，RSD＜12.7%
5.4精密度试验每种浓度的标准液作3份平行样品，计 7725i液相色谱手动进样阀