GX液相色谱法应用-反相GX液相色谱法分析甲苯和联苯

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

反相GX液相色谱法分析甲苯和联苯 一目的要求 1．理解反相GX液相色谱法的基本原理及影响组分保留值的因素 2．学习用反相GX液相色谱法分析混合芳烃 3．掌握HPLC 分析的定性定量方法 4．理解流动相组成对样品组分保留时间的影响 二方法原理 用非极性的十八烷基键合固定相，多以甲醇-水或乙睛-水作为流动相（极性流动相），用以分离非极性或极性小的化合物，该方法是目前Z常用的反相液相色谱法 化学键合固定相是在薄壳型或全多孔硅胶微粒上，通过化学反应把有机分子键合到无机担体表面其优点是固定相表面更加均匀一致，能灵活的改变吸附剂表面性质，提高选择性，增强稳定性，延长柱的寿命反相键合相的保留机制是疏水效应起主导作用，所以样品组分的疏水性差异是分离的基础对非离子型化合物，分子极性愈大，保留值愈小；对非极性化合物，分析表面积愈大，保留值愈大；在同系物中链愈长苯环愈多，保留值愈大流动相也影响被测组分的保留值，流动相的表面张力愈小，保留值愈小在常用的溶剂中，以水的表面张力Zda，因此流动相中水的含量减小，流动相的表面张力下降，组分的保留值减小 本实验分离甲苯联苯2 种芳烃的混合物，由于苯环个数或分子的表面积有显著差别，因此在反相GX液相色谱中得到很好的分离用保留时间定性，根据峰面积标准工作曲线定量 三仪器与试剂 1．仪器： GX液相色谱仪，检测器为二极 管阵列检测器 10uL HPLC 微量进样注射器超声波清洗器及玻璃器皿 2．试剂：甲苯联苯甲醇等试剂均为A.R.级二次蒸馏水 标准混合储备液：1.00mg/mL 甲苯联苯的甲醇溶液 3．色谱条件： 色谱柱：Shimadzu VO-ODS（4.6×150mm）C18 分析柱 流动相：A 液：水；B 液：甲醇用前用超声波脱气 UV-检测器，检测波长254nm 进样体积：10uL;流动相流速：1.0mL/min 样品：甲苯联苯的混合甲醇溶液 四试验步骤 1．开启色谱仪，先开启泵在线脱气机柱温箱检测器，再开启系统控制器，Z后开启电脑 2．双击CLASS-VP 软件，双击PDA 检测器，打开文件，设立新方法，设置流动相A 液和B 液的比例为1：9，流动相流量为1.0mL/min,柱温为40，检测波长为254nm，使其正常运行 3．标准溶液的配制：分别移取0.1mL,0.3 mL, 0.5mL 标准溶液储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容各溶液的浓度分别为：0.010mg/mL, 0.030 mg/mL, 0.0500 mg/mL 4．标准工作曲线的绘制：分别注入不同浓度的标准溶液10.0uL,记录色谱图以峰面积对各组分的进样量绘制标准工作曲线 5．试样的测定：注入样品溶液10.0uL,记录色谱图，由工作曲线计算未知样品中甲苯和联苯的含量 6．改变流动相的配比（1：9；0：10），观察色谱峰保留时间的变化 7．改变柱温（40，30），观察色谱峰保留时间的变化 8．实验结束时，用甲醇冲洗色谱仪液路系统和注射器，然后按照与开机相反的顺序关机 五结果处理 1.以峰面积对各组分的含量绘制标准工作曲线 2.根据保留时间进行定性；对试样各组分依据峰面积由标准工作曲线求得各组分的含量 3.计算不同流动相配比和柱温条件下，两峰的分离度 六注意事项 1.正确使用微量进样注射器，并保持其洁净抽取试样时，注射器内部不得存留气泡，针头残存液体要用滤纸吸干 2.吸取不同试液时，先用甲醇冲洗干净，再用要抽取的试液抽洗3 次后，方能抽取进样使用完毕，须用甲醇抽洗干净后存放 LC-600A 液相色谱仪（食品行业-液相分析）LC600A LC600A液相色谱仪 KJT-300(500)氮氢空一体机 KJA-2L(5L)空气发生器