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体外诊断试剂-超级ELISA优化方案

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体外诊断试剂-超级ELISA优化方案

3 竞争YZELISA方法的建立
3.1 的酶标记及质量鉴定
本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在上[1],标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化,洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS,流速为15ml/h,分步收集,每支3ml,以紫外分光光度计测A280吸光度值,以洗脱体积为横坐标,吸光值为纵坐标做图,收集**峰即为酶标峰
标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm及403nm处测定酶标记物的A值,计算免疫球蛋白量摩尔比值酶结合率以及标记率
3.2 包被用缓冲液及Z适包被抗原浓度的优化
3.2.1 包被缓冲液的优化
包被抗原时,为了得到**的包被效果,我们采用了碳酸盐缓冲液(50mM ph9.6 )磷酸盐缓冲液(50mM ph7.6)以及TRIS盐酸缓冲液(50 mM ph7.6)三种缓冲液作为包被液,抗原包被浓度为5ug/ml,及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1:400及1:300,用自动酶标仪分析,选择**的包被缓冲液系统(表5)同时为了保证缓冲液能够长期保存,我们在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作为防腐剂
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