前言
全 球对于乳制品中功能糖的数量和质量的控制需求越来越高。乳果糖是一种在乳制品中发现的功能糖,当以少量摄入时,能够调节肠道健康。乳果糖、乳糖和半乳糖的化学结构非常相似,导致色谱分离困难。
本文开发了一种使用亲水作用液相色谱(HILIC)检测并完全分离乳果糖、乳糖和半乳糖的方法。HILIC是一种利用极性固定相和流动相(包含水和更少极性的溶剂,如乙腈)的一定比例的色谱技术。
实验部分
01 仪器
采用包含以下模块的SCION(赛里安)LC6000高效液相色谱仪系统:
▪ 集成六通道真空脱气的SCION LC6100四元泵
▪ SCION LC6210 高精度、低残留自动进样器
▪ SCION LC6320 立式柱温箱
▪ SCION LC6460 RI示差检测器
02 液相色谱条件
表1. 方法参数
试剂及标准品
制备了包含每个目标分析物(乳果糖、乳糖和半乳糖)的校准标准品,浓度范围从0.01%到0.05%。
结果
01 示例图谱
当分析功能糖时,最关键的是完全分离每个目标化合物。图1展示了使用HILICpak VG-50柱的分离度。
图1.乳糖、乳果糖和半乳糖示例色谱图
中国药典(2020年版)描述了在使用RI检测器和HILIC模式色谱分析功能糖时必须满足的分离规范。中国药典(2020年版)规定:“乳果糖和乳糖之间的分离度大于2.0”。
使用HILICpak VG-50色谱柱与SCION LC6000-RI检测器相结合,所得到的分析分离度超过了药典要求,且在15min内完成分离,突显了在HILIC模式下使用LC6000液相色谱仪时进行色谱分离的卓 越性能。下表是中国药典(2020年版)规定的乳果糖到乳糖的分离度要求, LC6000完全满足要求:
表2. 乳果糖和乳糖之间的分离度
02 标准曲线
所有目标化合物在0.01%至0.05%浓度范围内的校准曲线。所有目标化合物表现出良好的线性,相关系数R2≥0.9991.详见图2、图3、图4。
图2. 乳果糖标准曲线
图3.半乳糖标准曲线
图4. 乳糖标准曲线
结论
本应用使用SCION(赛里安)LC6000配置LC6460 RI检测器,在HILIC模式下实现乳果糖、半乳糖和乳糖优异的分离度和线性,并且在十五分钟内完成分析,该方法是应对复杂糖分析的理想解决方案。
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