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培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,Z好现配现用。小面就让小编来带你了解一下培养基的配置。
培养基的配置
一、配制用水
培养基中水所占的比例非常大,因此培养基的质量直接受到水的质量的影响。根据Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,通常实验室里符合使用条件的水为其通过玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水。
二、培养基
培养基分为人工、天然两种类型。通常实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。
三、血清
小牛血清(或胎牛血清)是培养中常常使用的血清。血清也不能通过高压灭菌无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时,培养细胞种类、时间决定血清的量,通常用10—15%。因为血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。
四、KJ素
为了避免培养时受到细菌的污染,可以将适当KJ素添加到培养基中,通常用量与组织细胞培养相同:卡那霉素100单位/毫升,或双抗--青霉素100单位/毫升,链霉素100微克/毫升。
五、植物血凝素(PHA)
非增殖期的细胞不能制备染色体,如人外周血淋巴细胞,但在离体培养过程中,在PHA的作用下,可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。
经实验测定,培养后44-48小时和68-72小时是其的分裂高峰。粘多糖,蛋白质是PHA的两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂,蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加,直至全部免疫活性细胞均被激活为止,但PHA浓度过高会引起凝集,一般采用4%浓度为好。
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