电泳仪

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

优点

1.由于硫酸根和羧基没有，使琼脂的电渗。

2.吸附蛋白质很少，所以没有拖尾现象。

3.凝胶孔径比较大，结构均匀，能够被用来对酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质进行分离。

4.具有比较好的透明度，能够直接染色或者干燥成薄膜后染色。

5.对紫外光不吸收，作定量测定的方法能够直接使用紫外光吸收法。

6.样品比较容易回收，经常被用来制备。

缺点

1.具有比较差的机械强度，容易破碎，浓度不可以过低。

2.容易受到细菌的污染，保存不方便，配置的时间需要临近使用的时间。

3.琼脂糖支持层上的区带很容易扩散，电泳必须马上固定染色。

4，比PAGE区带小，分子筛作用小。

应用

被用来电泳分离如大分子核酸、病毒等分子量比较打的样品，如今在核酸的研究中被广泛的使用。

根据分子质量大小对DNA进行分离的凝胶电泳技术成为了对基因工程重组DNA分子进行分析鉴定的重要的实验方法。

如今是DNA核苷酸序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础等许多分子生物学研究的通用方法，学术界对其高度重视。

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带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。

1.免疫固定电泳

可以分型各类Ig以及其轻链，在分型和鉴定临床常规M蛋白时常常被使用。通常在诊断和鉴别诊断多克隆Ig病、CSF寡克隆蛋白、重链病、多组分单克隆Ig病、本周氏蛋白和游离轻链病、单克隆Ig病以及单克隆Ig增殖病方面被应用。

2.同工酶电泳

同工酶电泳在临床上分析同工酶或者同工酶亚型时被使用。

（1）CK同工酶亚型

（2）肌酸激酶（CK）同工酶

（3）乳酸脱氢酶（LD/LDH）同工酶

3.脂蛋白电泳

各种脂蛋白（包括胆固醇和甘油三酯）均通过脂蛋白电泳来检测，脂蛋白电泳主要用于动脉粥样硬化和相关疾病的发生、发展、诊断和ZL（包括ZL性生活方式改变、饮食和调脂药物ZL）效果观察的研究、高脂血症的分型和冠心病危险性估计等。

4.血清蛋白电泳

通过醋酸纤维薄膜或琼脂糖电泳对新鲜血清进行电泳、染色后，一般有α1、α2、β、γ球蛋白以及清蛋白这5条带可见。许多疾病会改变各个蛋白组分的比例和总血清蛋白浓度，血清蛋白电泳图谱对我们针对和鉴别某些疾病会有所帮助。

5.尿蛋白电泳

临床进行尿蛋白电泳的主要目的有：

（1）对于尿蛋白的来源进行确定

（2）对肾脏病变的严重程度进行了解，从而为诊断提供帮助。当不能够进行肾活检的时候，尿蛋白电泳对于肾脏主要损害的临床判断起到很好的协助作用。

6.血红蛋白和糖化血红蛋白电泳

应用电泳法对患者血液中Hb的类型和含量进行鉴定，对于临床诊断和ZL贫血具有重大的意义。Hb电泳结果应当以不同年龄人群的分析为根据。

与电泳仪的分类相关文文章：
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不同的物质在一定的电场强度下，因为所带电荷不同，所以受到的引力不同，往相反的电极泳动的速度不同从而达到分离的目的。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离目的的技术，称为电泳技术。

使用方法

1.使用去污剂反复擦洗并晒干凝胶玻璃板，再使用无水乙醇将其表面插干净。

2.在对胶进行制备时，根据凝胶厚度来挑选合适的电泳玻璃，在平板内芯外侧的方向，顺着内芯一侧的紧固侧板小心地将凹形玻璃板放入。

3.操作台面必须平整，当在内芯内放入玻璃后，在对凹、平板的底部边缘都和台面对齐进行确认后，再将旋钮旋紧。值得注意的是，密封的重要条件就是使凹、平板的底部边缘都和台面对齐。

4.在制胶底座上安装装好玻璃板的内芯，再将吊扣压紧。

5.缓慢地往凝胶腔内注入配制好的分离胶溶液，注意要避免气泡产生。

6.在灌完分离胶后，为了确保分离胶的无氧聚合，使用滴管将一层正丁醇溶液或蒸馏水注在分离胶表面。

7.当分离胶聚合后，倒出并且用吸纸吸干表面的正丁醇溶液或蒸馏水。

8.在分离胶表面注入高度距离凹板下沿2-3mm或者和其平齐的浓缩胶。

9.将相应的加样梳插入到凝胶内。

10.当凝胶聚合后，将梳子取出，将搭钩打开，在电泳槽底槽中放入由制胶器中取出的内芯，制胶过程结束。

注意事项

1.在对玻璃板进行组装时，没有必要将下部的两个螺栓拧得过紧。

2，对于小分子量蛋白质，浓度高的胶效果更佳，对于大分子量蛋白质，浓度低的胶效果更好。

3.TEMED为促进聚丙烯酰胺聚合的加速剂，在配置分离胶时，每个胶板滴两滴会有不错的效果。

4.电极缓冲液配制麻烦，占体积，用量多。

5.丙烯酰胺是神经性毒剂，能刺激皮肤，操作时应当将手套戴上。

6.为了防止铝板的表面长期堆积污垢不能充分接触玻璃板，需要在使用完后及时的清理。

7.产品是易碎物，需要轻拿轻放。

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　　电泳仪是实现电泳分析的仪器，可以对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备，在临床检验或实验研究中具有重要的意义。市面上的电泳仪规格非常多，要如何选购适合的电泳仪呢?

电泳仪类型选择

　　1、稳压稳流电泳仪：

　　稳压稳流电泳仪是目前国内中、低压电泳实验中应用Z广泛的电泳仪之一。其输出电压的调节范围为0V～600V、输出电流为0mA～100mA。这种电泳仪工作稳定性好、调节范围宽，并设有完善的短路保护电路和过流保护电路。

　　2、全自动醋纤膜电泳仪：

　　全自动醋纤膜电泳仪为全自动电泳仪，有可见光单系统，使用醋酸纤维薄膜电泳片，优点为自动化程度高。只需将样品、试剂、电泳片放好，人员可离机完成实验并得到结果。

　　3、全自动荧光/可见光双系统电泳仪：

　　全自动荧光/可见光双系统电泳仪只需将样品、试剂和琼脂糖凝胶电泳胶片放好后，其Zda优点是荧光系统全自动，只需要20min即可完成电泳分析，速度非常快。操作人员可离机完成实验并得到结果。

　　4、全自动琼脂糖电泳仪：

　　全自动琼脂糖电泳仪，有可见光单系统，使用琼脂糖凝胶电泳胶片。灵敏度高，可适用于低浓度蛋白检验，如尿蛋白、脑脊液蛋白、同工酶的分离。但其自动化程度较差。

　　由于这类电泳仪所能做的项目较多，且灵敏度较高，仍为许多实验室所接受。

　　5、全自动电泳分析系统：

　　全自动电泳分析系统，将上述仪器的优点集于一身，自动点样、电泳、呈色(或染色、脱色)、烘干，自动化程度非常高。可用各种电泳片，包括琼脂片、醋酸片、聚丙烯酰胺等，采用可见光及荧光呈色双系统，是一种较理想的电泳仪。

电泳仪的电源选择

　　目前市面上的电泳仪电源，按电压分为高压1500～5000V、中压500～1500V、低压500V以下三种;按电流分为大电流500mA～2000mA、中电流100～500mA、小电流100mA以下三种;按功率分为大功率200～400W、中功率60～200W、小功率60W以下三种。

　　从电压的角度来看，用于核酸(琼脂糖)水平电泳、PCR电泳、DNA回收、印迹转移等实验只需Zgao电压300V;用于蛋白垂直电泳、种子纯度电泳、醋酸纤维膜电泳等需要使用Zgao电压600V左右的电泳仪;用于DNA测序(SSR分子标记)、等点聚焦电泳、双向电泳等要求Zgao电压3000V;用于DNA测序电泳(AFLP分子标记)要求Zgao电压3800V。

　　输出的所有参数根据其型号的不同都有一个特定的工作范围，如果实际需要超过这一范围，就应当选择能够满足使用的另外型号的电泳仪电源。因为高、低压电泳仪内部结构特征不同，由于高压电泳仪常附加着多功能，而且高压电泳仪决不能空载运行(容易造成人身伤害内部器件损坏)，导致操作上难易程度的不同等。因此，选用合适规格的电泳仪很重要。

　　如果需要一台电泳仪电源带几个电泳槽工作时，首先要确定总电流不要超过仪器的Zda范围，其次各电泳仪之间是并联的，因而每个电泳仪的电压都是相同的，总电流为各电泳仪电流之和。使用时注意不能超出电泳仪电源额定的范围。

电泳仪的安全保护措施选择

　　实验安全一直是实验过程中Z为关注的问题，一台电泳仪不仅要好用，更要安全可靠。目前大部分厂家都有了相关的功能，但是，不同厂家对于漏电、断电、短路等情况的保护措施不一样。

　　有的电泳仪出现以上不安全因素的时候，电泳仪发出报警信号，然后通过软件方式切断电源，通过按动“STOP”按钮结束报警。但是这个方法的弊端是，程序在通常情况下是正常工作的，但一定不是的安全。在受外界信号干扰、受潮等因素，会导致程序出错，也就没办法1**%保证实验人员的安全。

　　有的电泳仪在出现以上报警信号后，屏蔽所有按键，也就是说，报警产生的时候，你按动任何按键是不会起作用的。那么怎么办，世界上没有任何一种办法比物理切断电源更加安全!所以，此时要求实验人员必须手动切断电泳仪的总开关，结束电源供电。这个时候，才是Z安全的，才可以放心的去检查到底是哪方面的问题，直到排除故障再继续使用。

　　电泳仪本身就是一个高于市电电压的设备，因此安全的设备对于实验室人员人身安全来说，至关重要!

与电泳仪的选购技巧相关文文章：

毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称GX毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE），是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。

进样方式

因为毛细管有着非常细的内径，所以和常规电泳以及层析的进样方式会有所差异。毛细管电泳主要包括流体力学进样和电迁移进样两种进样方式。

电动式进样

1.电迁移进样

将样品接触毛细管的阳极，在短时间里施加电压，利用电迁移的方式，样品进入毛细管的阳极端。

进样量：受到电渗速度、电迁移速度、电迁移时间、电压的强度以及溶质浓度影响。

优点：具有准确进样，重复性好以及易于控制的特点。

缺点：歧视浓度低的组分。

2.电击进样

通过电击方法在毛细管的阳极往毛细管内送入样液。

进样量：受到电击次数、电击功率和溶质浓度C的影响。

优点：受到广泛的应用。

缺点：不容易控制上样。

流体力学进样

1.虹吸进样

进样的时候，抬高阳极槽使得槽的落差形成，在极端的毛细管内利用液体重力差吸入液体重力差。

进样：进样量和样液粘度成反相关，和落差、样品浓度、进样时间成正相关。

优点：能够简便的操作，有很好的重复性。

缺点：不适合凝胶电泳，对于自由电泳比较合适。

2.加压进样

进样的时候，施加一定的液压，密闭阳极端在毛细管吸入样品。

进样量：进样量和样液粘度成反相关，和液压强度、样品浓度、进样时间成正相关。

3.真空进样

在毛细管内利用两端的气压差送入样品。

进样量：进样量和样液粘度成反相关，和真空度、样品浓度、进样时间成正相关。

与毛细管电泳仪相关文文章：
• 毛细管电泳仪的结构
• 毛细管电泳分离的受力
• 毛细管电泳的常用术语

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

一、配胶

根据所要分离的DNA分子的大小，对琼脂糖粉末进行适量的称取，再锥形瓶中放入称好的琼脂糖粉末，再将适量的1×TAE电泳缓冲液。

然后在微波炉内放入溶液加热摇匀到完全溶化呈现透明状，适当冷却后再将其往胶托内倒入。

在胶完全冷凝后将其放入电泳槽，胶面必须完全浸没于电泳槽的缓冲液里。

二、点样

由于样品之间的差异，点样体系也不相同，点样体系包括如下两种：

1.样品能够直接进行点样。

2.样品+6Xloading buffer

Z后要记住点marker，并且将胶的位置摆正。

三、电泳

点样完成后，将电源连接上，将电源的参数设置好，开始电泳。当溴酚蓝（蓝色）移动到一定的长度，电泳就能够停止。

电压的要求为：每1厘米胶小于需要不超过20伏特的电压样品出孔时，使用1厘米胶3伏特的低压15分钟，然后将电压调回到标准电压，能够跑出比较好的条带。

四、EB染色

溴化乙淀为一种扁平分子，它能够往核酸双链的配对碱基之间嵌入，当紫外线对EB-DNA复合物照射的时候，其有不一样的效应出现。

值得注意的是：要对污染区和非污染区严格地区分，不要往非污染区放入从污染区拿到的物品，应当要及时丢弃碰到过EB的手套。

五、成像拍照

图像的摄录，处理和打印通过图像分析系统一体化。为了使条带不丢失，使摄录凝胶图像在低照度下的灵敏度有所保证，需要采用高分辨率的CCD。

六、胶图分析

与凝胶电泳仪相关文文章：
• 琼脂糖凝胶电泳常见问题及解决方法
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