动物产品中马、驴、骡源性成分的定性检测方法 实时荧光PCR法

　　荧光定量PCR技术

　　在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。

　　一、规范性引用文件

　　《GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法》、《GB/T 27403　实验室质量控制规范　食品分子生物学检测》、《SN/T 1193　基因检测实验室技术要求》

　　二、仪器和设备

　　1、电子天平，感量0.01 g。

　　2、微量可调移液器(量程为10 μL、20 μL、100 μL、1 000 μL)。

　　3、恒温水浴锅。

　　4、磁力搅拌器。

　　5、高速冷冻离心机。

　　6、二级生物安全柜。

　　7、高压灭菌锅。

　　8、普通冰箱：4 ℃，-20 ℃。

　　9、pH计。

　　10、核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。

　　11、实时荧光定量PCR仪。

　　三、试剂和材料

　　试剂的配制及试验中的操作规范应按GB/T 27403和SN/T 1193的规定执行。

　　除另有规定外，试剂应为分析纯或化学纯级别，实验用水应符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

　　检测用引物和Taqman探针序列(详见表1)。

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