费氏弧菌发光杆菌保藏方法

费氏弧菌发光杆菌保藏方法
（一）斜面冰箱保藏法
这是蘑菇菌种的一种短期保存法，因为它简单易行，不需特殊设备，并能随时观察保藏菌种的情况，因此也是常用的菌种保藏方法。
１、保藏方法蘑菇菌种斜面冰箱保种一般使用PDA斜面培养基即可。菌种移接后，放在22-24℃温度下培养,要勤检查,当菌丝健壮地长满试管时,及时挑选无污染的培养斜面,棉塞用硫酸纸包扎后放置在4℃的冰箱中保藏。一般2-3个月转管一次。
２、注意事项：由于斜面冰箱保藏是在4℃下进行,微生物单孢分离物活动并未停止,需要经常转管移接,因此对于保藏所用的斜面菌种质量要求较高，其菌丝形态、菌落特征应保持原有特性，操作人员必须对斜面菌种质量应具有有一定的鉴别能力，所挑选的菌种才能适合保藏，其次菌种的菌龄不能太幼也不能太老，否则冰箱保藏后转管扩接易造成退化。再则冰箱温度应控制在2-4℃之间,尽量恒温使菌丝体处于稳定的生理状态。
（二）粪草管冰箱保藏法
１、保藏方法：粪草管的培养基是由腐熟麦秆粉100,腐熟牛粪粉25,麸皮8,石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量65%左右,pH7.5制备而成,调配后装入试管中,经高压灭菌后,接入菌种块,放在22-24℃温度下培养。要勤检查是否有污染，当菌丝健壮地长满草基试管时，及时挑选生长正常无污染的试管，棉塞头用硫酸纸包扎后放置在2-4℃的冰箱中,该保藏方法为中期保藏，一般2-3年转管一次。
２、注意事项：由于粪草管可保藏2-3年时间,因此如何防止粪草管的水分损失是该保藏方法时间长短的关键所在,一方面培养基含水量不能低于62%,另一方面棉塞用硫酸纸包扎后可加些蜡进行封口,防止水分蒸发。再则有条件应把试管保藏在具有保湿的冰柜或冰库中，温度控制在2-4℃,湿度控制在90%左右。
（三）液体石蜡保藏方法
液体石蜡防止培养基水分蒸发，隔绝斜面费氏弧菌发光杆菌与空气接触，YZ菌丝的单孢分离物，可能使其处于休眠状态，推迟细胞衰老，延长菌丝的保藏，一般可保藏5-7年，是一种中长期的菌种保藏方法。
１、保藏方法：液蜡保藏蘑菇菌种的培养基为PDA斜面即可。将菌种块移接到PDA斜面上,在22-24℃下培养15-20天,然后用液体石蜡封藏保存。液体石蜡要选化学纯的，在121℃下高压灭菌30分钟,再将液体石蜡在160℃烘箱中加热1-2小时。亦可将高压灭菌后的液体石蜡放置在40-60℃温箱中,使灭菌后的液体石蜡层出现乳白色直至变成完全透明的无色为止,目的是将高压灭菌时侵入液体石蜡中的水蒸发干净。将灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管罐到长满菌丝的斜面试管中，液体石蜡要高出斜面1.0厘米左右，然后用无毒泡沫试管塞塞好，置室温中保藏。
２、注意事项：菌丝的培养时间不能太短，为防止菌丝体的进一步发育，可适当延长菌龄或让试管先置在冰箱中(2-4℃)2天后再加入液体石蜡。倒入的液体石蜡要超过斜面1.0厘米左右,如过低液体石蜡挥发后会露出斜面,从而导致斜面培养基的干涸,缩短了保藏时间。烘烤液体石蜡应乇底，尽可能把水分蒸发干净，防止水蒸汽蒸发导致棉花塞潮湿长霉而影响费氏弧菌发光杆菌的保藏。

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