PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒说明书

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒说明书

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。

技术背景:

作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地与样品中双链DNA结合，产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（StandardDeviation）低，不受样品化学成分的干扰。

产品内容：

染色液（ReagentA）微升

稀释液（ReagentB）毫升

标准液（ReagentC）毫升

产品说明书1份

保存方式：

保存染色液（ReagentA）和标准液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（ReagentA）避免光照，有效保证6个月

用户自备1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器比色皿或96孔板：用于荧光分析的容器荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒实验步骤：

一、测定准备：

1．准备好待测样品，置于冰槽里

2．设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长480nm，散发波长530nm，并置零

3．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentA）置于冰槽里融化。然后移出xx毫升稀释液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升染色液（ReagentA），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

二、构建标准曲线：

1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2．分别加入xx微升稀释液（ReagentB）到每个离心管

3．移取xx微升标准液（ReagentC）到1号管，混匀

4.小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentC）到2号管，混匀

5．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentC）到3号管，混匀

6.小心移取xx微升3号管稀释的标准液（ReagentC）到4号管，混匀

7．将1至5号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表：

管号

缓冲液（ReagentB）

标准液（ReagentC）

标准DNA总量

1

xx微升

xx微升

xx微克

2

xx微升

xx微升1号管

xx微克

3

xx微升

xx微升2号管

xx微克

4

xx微升

xx微升3号管

xx微克

5

xx微升

空对照

0

8．移取xx微升含有染色液（ReagentA）和稀释液（ReagentB）的染色工作液到新的比色皿

9．加入500微升上述配制的标准液

10．室温下，孵育5分钟，避免光照

11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（RelativeFluorescenceUnit；RFU）

12.重复实验步骤8至11四次

13.绘制标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X轴）为DNA含量（微克）

三、样品检测

1．移取xx微升含有染色液（ReagentA）和稀释液（ReagentB）的染色工作液到新的比色皿

2．加入500微升待测样品

3．室温下，孵育5分钟，避免光照

4.即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（RelativeFluorescenceUnit；RFU）

5．根据标准曲线获得样品对应DNA含量（微克）

6．样品实际DNA浓度：

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒注意事项：

1．本产品为20次（比色皿）和100次（96孔板）操作，包括标准曲线测定

2．操作时，须戴手套

3．使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过2小时，且注意避光

4．建议使用塑料管配制染色工作液，而不是玻璃制品

5．孵育时，避免光照

6．系统检测，标准曲线测定1次即可；如果仪器更换，则需要重新测定1次

7．如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量

8．可以使用荧光酶标仪检测，试剂用量和体系均除以5，包括标准DNA含量，其计算公式[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度（微克）X样品稀释倍数]÷0.1（样品容量；毫升）＝微克/毫升

9．盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNA和RNA不会干扰检测

10.本公司提供系列DNA检测试剂产品

质量标准：

1．本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定高度敏感

使用承诺:

上海户实秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

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