双缩脲法测蛋白含量试剂盒说明书

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【导读】一、测定原理强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量，测定范围为1~10mg...

一、测定原理

强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓

度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量，测定范围为

1~10mg蛋白质。

二、吸光值测定

按下表操作：

试剂空白管测定管

双蒸水0.2ml/

待测液/0.2ml

双缩脲试剂0.8ml0.8ml

混匀，室温静止15min，于540nm比色，空白管调零

三、标准曲线绘制

用10mg/ml的BSA分别配制浓度为0、2、4、6、8、10mg/ml的标准BSA溶液，按下

表操作：

试管号123456

标准BSA浓度（mg/ml）0246810

标准BSA溶液

双缩脲试剂

0.2ml

0.8ml

混匀，室温静止15min，于540nm比色，以1号试管调零

计算得标准曲线公式为：y=0.0411x（x为蛋白浓度，y为吸光值）

四、结果计算

将所测得的吸光值A540代入标准曲线公式即可计算出蛋白浓度，单位为mg/ml

注意事项：

1、样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml须做相应稀释

2、该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰，待测样品中应不含这些物质

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2004-11-06 09:23:09

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