原代组织细胞的解离

从原代组织上获取单个细胞悬液的常用方法是利用酶的解聚作
用。尽量缩短用酶处理细胞的时间，以获得Zgao的存活率。按下
面的方法解聚整个组织，以获得大量细胞。
胰酶
1．先去除无关组织，然后用灭菌的解剖刀或剪刀将组织切成　　
　3-4mm大小碎块。通过在不含钙镁的平衡盐溶液进行重悬来清　
洗组织碎块。待组织碎块沉降后去掉上清液。重复清洗2-3次。
2．将装有组织碎块的容器置于冰上，去掉所有上清液。在不含钙
镁的平衡盐溶液中加入0.25%胰酶（每100mg组织大约需要
1ml胰酶）。
3．在4℃下孵育6-18小时，使低活性的胰酶尽量渗入组织。
4．缓慢倒掉胰酶。在37℃下将残余的胰酶与组织碎块共同孵育　
　20-30分钟。
5．向组织碎块加入温热的完全培养基，并轻轻地吹吸以分散组　
　织。如果使用无血清培养基。还应加入大豆胰酶YZ剂。
6．用灭菌的不锈钢网（100-200μm）过滤细胞悬浮液，直至所有
组织完全散开。计算细胞个数，然后接种细胞进行培养。
胶原酶
1．用灭菌的解剖刀或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。用Hanks平衡
盐溶液（HBSS）将组织碎块清洗数次。
2．加入胶原酶（50-200单位/ml胶原酶HBSS）。
3．在37℃下孵育4-18小时。加入3mMCaCl2可以提高解离效率。
4．用灭菌的不锈钢网或尼龙网过滤细胞悬浮液，将离散的细胞和
组织片段与大块的组织碎片分离。如需进一步解离，可向组织片
段中加入新鲜的胶原酶。
5．通过离心HBSS清洗细胞悬浮液数次。
6．用培养基重悬细胞。计算细胞个数，然后接种细胞进行培养。
分散酶
1．用灭菌的解剖刀或剪刀将组织切成3-4mm大小碎块。用不含钙
镁离子的平衡盐溶液清洗组织碎块数次。
2．加入分散酶（0.6-2.4单位/ml分散酶不含钙镁的平衡盐溶液）。
3．在37℃下孵育20分钟至数小时。
4．用灭菌的不锈钢网或尼友网过滤细胞悬浮液，将离散的细胞和
　组织片段与大块的组织碎片分离。如需进一步解离，可向组织片
　段中加入新鲜分散酶。
5．通过离心平衡盐溶液清洗细胞悬浮液数次。
6．用培养基重悬细胞。计算细胞个数，然后接种细胞进行培养。

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