动物组织提取基因组DNA

一、准备材料
　　哺乳动物新鲜组织。
二、所需设备
　　移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
三、应用试剂
　　1、分离缓冲液：10mmol/LTrisClpH7.4,10mmol/LNaCl,25mmol/LEDTA。
　　2、其它试剂：10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml或粉剂），，酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），无水乙醇及70%乙醇，5mol/LNaCl，3mol/LNaAc，TE。

四、操作流程:
　　1.切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵（越细越好）。
　　2.倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。
　　3.加1ml10%SDS,混匀,此时样品变得很粘稠。
　　4.加50ul或1mg蛋白酶K,37℃保温1-2小时,直到组织完全解体。
　　5.加1ml5mol/LNaCl,混匀,5000rpm离心数秒钟。
　　6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提。待分层后,3000rpm离心5分钟。
　　7.取上层水相至干净离心管,加2倍体积抽提（在通风情况下操作）。
　　8.移去上层,保留下层水相。
　　9.加1/10体积3mol/LNaAc,及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。
　　10.用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1mlTE中,-20℃保存。
　　11.如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清;如要除去其中的RNA,可加5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃保温30分钟,用酚抽提后,按步骤9-10重沉淀DNA。
注：本文基因组DNA的提取属于技术文章文章，主要介绍基因组DNA方面的知识，内容仅供学习交流与参考。

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