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- 【导读】如今的科研事业越为广泛,实验室抗体试剂的应用发展也越来越好。今天,还包括了了二抗的选择,一起来看下:1.二抗的主要应用可以应用到几乎所有类型的免疫检测中,尤其是Westernblo...
如今的科研事业越为广泛,实验室抗体试剂的应用发展也越来越好。今天,还包括了了二抗的选择,一起来看下:
1.二抗的主要应用
可以应用到几乎所有类型的免疫检测中,尤其是Westernblot、免疫组织化学和免疫细胞化学。
事实上,二抗在Elisa及流式细胞术中应用也很广泛,不仅用于科学研究,而且广泛的应用于临床分析和疾病诊断。比较而言,二抗在免疫沉淀中的应用相对较少。以下内容是基于对所收集的二抗信息进行统计分析后得出的一些结论,对于您在具体的实验中如何选择Z适合的抗体具有借鉴作用。
2.选择二抗的方法
①考虑因素:有一抗的物种、产生二抗的宿主、一抗的类别或亚类、二抗所耦联的探针类型及二抗的形式等等。因此选择哪种类型的二抗很大程度上决定于您所使用的一抗是什么,尤其针对种属和类别而言。
②与一抗的联系:通常情况下,一抗可以在山羊、小鼠、兔子、大鼠及绵羊体内制备,其中属小鼠及兔子Z为常见,相应的,二抗的种属也应当与一抗的相一致。而对于制备二抗的宿主,则应选择另外一种不同的动物,一般选用驴、山羊、兔子、绵羊或其他较大的动物,可以实现二抗的大规模制备,其中又属山羊使用Z多。
③二抗类别或亚类的选择:应遵循与一抗类别或亚类相一致的原则,其中抗IgG使用Z多。这可能是因为除了五种类别的单克隆抗体外,很多一抗是多克隆抗体,属于IgG类免疫球蛋白。此外anti-IgG可以识别几乎所有类型的IgG亚类,因此,在不清楚一抗是属于那个类别或亚类的时候,anti-IgG抗体是个不错的选择。
此外,整个IgG分子是Z常用的一种二抗分子形式,而F(ab’)2片段或Fab片段一般仅用于特殊实验中,如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况,或需要封闭内源性免疫球蛋白的时候。
由于Elisa二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛。对于二抗所耦联的探针的选择,主要取决于具体的实验。对于Westernblot,Z常用的探针是HRP。
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- 2004-11-29 09:23:23
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