ELISA法细胞凋亡检测操作步骤

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【导读】细胞凋亡的发生是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180bp～200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复...

细胞凋亡的发生是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180bp～200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法，应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体，与核小体片段形成夹心结构，可特异性检测细胞溶解物中的核小体片段。

ELISA法细胞凋亡检测操作步骤:

1.收集细胞，离心后，用200μl溶细胞缓冲液重新悬浮，室温下作用30min。（培养细胞的上清液、血浆和血清都可作为检测样本)

2.取样品离心后(1000r/min,10min),吸取20μl上清液，加入链霉亲合素包被的培养板孔中。

3.加入80μl免疫反应试剂含抗-DNA-POD、抗组蛋白-生物素及温育缓冲液(按1︰1︰18混合)，室温下孵育2h(置摇床上，250r/min)。

4.取上清，用300μl温育缓冲液洗涤3次，小心移去洗涤液。

5.加入100μl底物缓冲液，室温下孵育使颜色变化至适合(置摇床上)。

6.尽快作比色分析(10min～20min内)，用底物缓冲液作空白对照，以波长405nm，参考波长492nm进行检测。

2004-07-23 16:27:07

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