超纯 RNA 提取试剂盒（TRIzol）

超纯RNA提取试剂盒（TRIzol）

试剂盒组成成份请在线联系

lBufferWB使用前加入（96~1**%）乙醇。lBufferRT中含有高浓度盐。lRNA纯化柱存贮于2~5℃，并在此温度下可以存贮1年。l所有其他成分可存贮于室温（15~25℃）干燥环境；如果存贮时间长于1年，我们建议将BufferRT存贮于4-8℃。使用须知：1、超纯RNA提取试剂盒应用于分子生物学，此产品不可应用于诊断疾病的预防和ZL。2、在化学品操作前，我们需要穿防护服、一次性手套和护目镜。3、BufferRT包含有胍盐，具有漂白作用，如果此液体有溢出，用水或有效的实验室清除剂（1%NaCl）清除。试剂盒介绍：本RNA纯化试剂盒利用传统TRIzol结合柱膜法快速纯化植物，动物，组织，细胞，微生物RNA及真菌菌丝RNA方案，适用于大多数物种。超过100mg的植物组织可应用此RNA纯化试剂盒，本试剂盒提取的RNA中DNA含量极低，如果DNA对实验敏感性较强，建议使用DNaseI柱上消化。RNA快速纯化试剂盒可以在1小时内提取样品总RNA（包括细胞核RNA、细胞质RNA），提取的RNA可以直接用于RT-PCR、Northernblotting等。纯化得到的RNA用低盐溶液或者水洗脱并应用于下游实验，纯化得到的DNAA260/A280值可达到1.9~2.0，这表明RNA纯度较高，且260nm吸收峰值较好。
自备设备及耗材：1.高速离心机2.漩涡振荡器3.金属浴4.无水乙醇5.液氮6.EP管7.CHCl3
提取方案：小量提取样品总RNA（不含DNaseI）小量样品总RNA提取（MiniProtocol）1、如果您首次使用超纯RNA提取试剂盒，请按照以上重要注意事项。2、BufferRT颜色发黄时不影响正常使用。开始前准备：1、BufferWB在使用前加入乙醇。2、BufferEB使用前65℃预热，有助于提高RNA得率。提取步骤：1、样品处理：A.组织：收集的新鲜材料如果不能马上使用，请将其放入液氮中冷却，并且Z终保存于-80℃，
已经干燥了的材料可以在室温中存贮，30mg-80mg组织液氮研磨后加入1mlBufferRT后匀
浆处理；
B.单层培养细胞：吸取培养液，加入1mlBufferRT匀浆；C.细胞悬液：离心收集细胞，加入1mlBufferRT匀浆；2、样品中加入BufferRT后，反复吹打混匀，充分裂解样品，室温放置5min；3、按照每1mlBufferRT加入200μlCHCl3比例加入CHCl3，剧烈振荡30sec，室温放置2min；4、将裂解液4℃，12000rpm离心10min，RNA存在于Z上层的水相中；5、小心转移上清液到新离心管中，尽量不要吸到中下层液体；大约400μl液体能够被转移，对于一些物种来说可以少于400μl。6、加入等体积的预冷的无水乙醇，迅速混匀；例如：加入400μl裂解液，加入无水乙醇400μl，如果裂解液体积少于400μl，则按比例减少无水乙醇的用量，加入无水乙醇后会有少量沉淀生成，但不影响后续实验。7、将上步所得液体加入到RNA纯化柱中（大约每次加入量650μl~700μl），大于8000rpm离心1min，将收集的废液遗弃，并重新将收集管套入纯化柱中进行下一步；8、重复步骤7，将剩余液体再加入到纯化柱中，大于8000rpm离心1min，弃掉废液及收集套管；9、将RNA纯化柱放入一个新的收集套管中，加入700μlBufferRP，大于8000rpm离心1min，弃掉废液并将RNA纯化柱重新放入套管中进行下一步；10、加入700μlBufferWB到RNA纯化柱中，14000rpm（20000×g）离心2min，适当延长离心时间，致膜更加干燥;确认BufferWB中已经加入无水乙醇，乙醇的存在对随后的实验有严重影响，因此膜的干燥很
重要，离心后确保在进行洗脱前无乙醇的存在，随后弃掉废液及收集管。
在使用BufferWB漂洗过后，RNA纯化柱膜仅应有轻微的颜色，在离心后，小心移走RNA纯化柱，
确保不与收集管碰到，以确保不会有乙醇影响。11、将RNA纯化柱加入到一个新的离心管中，悬空滴加100μlBufferEB到柱膜上，室温温育5min（15~25℃），大于8000rpm离心1min；用50μlBufferEB洗脱RNA可以提高RNA浓度，但降低了总RNA获得率。12、重复上一步骤。一个新的离心管可以用于收集第二次洗脱的RNA或者使用原来的收集管继续收集RNA。

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