植物基因组DNA的RFLP 实验原理 实验试剂 实验设备 实验材料 实验步骤

植物基因组DNA的RFLP

DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间，也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性(restnictionfragmentlengtholymophorphism)。由于碱基顺序的差异，在不同的种或同一个种的不同个体之间，它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同，经特定的限制性内切酶切割后，所产生的限制性酶切片段在大小（长度）和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色，在紫外检测仪下观察，即可直接看到这种差异。电泳分离后，通过Southern杂交也可显示出已知DN**段的差异。

1.限制性内切酶

2.10×限制性内切酶缓冲液

3.0.5MEDTA(pH8.0)

4.溴化乙锭

5.琼脂糖

1.电泳仪和电泳槽

2.微量离心管

3.低温冰箱

4.37℃水浴锅

从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。

1.限制性内切酶酶切

  1)将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。

  2)取8支微量离心管按下表所示作好标记，并依次加入所需成分。

品种I

品种II

品种I－1

品种II－2

单酶切1#

双酶切2#

单酶切3#

双酶切4#

单酶切5#

双酶切6#

单酶切7#

双酶切8#

DNA

10

10

10

10

10

10

10

10

10×缓冲液

2

2

2

2

2

2

2

2

EcoRI

1

1

1

1

1

1

1

HindIII

1

1

1

1

无菌水

7

6

7

6

7

6

7

6

总体积(ul)

20

20

20

20

20

20

20

20

  3)混匀，慢速离心2秒，使溶液全部聚于管底。

  4)37℃保温2－3小时。

  5)加入1／10体积的0.5MEDTA溶液终止反应。

2.琼脂糖凝胶电泳分析

上海沪宇生物科技有限公司主要从事酶免ELISA试剂盒_原装试剂盒_进口ELISA试剂盒_进口化学及生化试剂等产品的销售和批发，并代理国外知名品牌如“RD”、“ATCC”、“sigma”、“gibco”、“amresco”、等。主要产品有：PCR试剂盒、金标试剂盒、细胞、血清、抗体、生物试剂、耗材、培养基、对照品、标准品等。