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- 【导读】中国是世界上较早开展研究逆流色谱技术的国家,它的应用范围十分广泛,如生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、海洋生物以及无机离子、保健...
ZG是世界上较早开展研究逆流色谱技术的国家,它的应用范围十分广泛,如生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、海洋生物以及无机离子、保健品原料、食品添加剂和化妆品等众多领域。
1.天然产物HSCCC可采用不同物化特性的溶剂体系和多样性的操作条件,具有较强的适应性,为从复杂的天然产物粗制品中提取不同特性(如不同极性)的有效成分提供了有利条件。因此在80年代后期,在世界范围内的"回归大自然"浪潮的席卷之下,HSCCC被大量用于天然产物化学成分的分析和制备分离,目前报道也Z多。例如:用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(3:7:5:5)分离粉防己干根粗提物 ;正己烷/乙酸乙酯/乙醇/水(6:3:2:5)或正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(1:1:I:I)体系分离红豆杉粗提物 ;分离紫杉醇混合物采用石油醚(40-60℃)/乙酸乙酯/甲醇/水(50:70:80:65)体系比较合适;采用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(3:7:5:5)有效分离肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸混合物 ;采用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/乙醇/水(5:7:5:1:1.5)五元体系分离紫杉醇和caphalornannine;氯仿/0.07 mol/L磷酸钠 0.04 mol/L柠檬酸缓冲液体系(pH:5.08,1:1)分离制备和番术鳖碱 ;用氯仿/甲醇/丙酮 /水(5:6:1:4)分离挪威云杉针叶粗提物 ;用正庚烷/乙酸乙酯/甲醇/水(3:l0:IO:7)分离杂交番茄枝种子的粗提物 等等,一般均采用下相作流动相。其它,尚有用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水两步分离紫杉醇的同系物例(eaphalonmmaine,7-epi-10-deaeetyltaxo1)等 ,diyi步采用(1:1:1:1),第二步采用(3:3:2:3或4:4:3:4)并实现制备分离,并发现甲醇含量对分离效果影响较大;还有用多维高速逆流色谱(Multidimensional HSCCC)连续分离制备异鼠李亭、4,5,7-三羟基黄酮醇 槲皮苷,采用氯仿,甲醇/水(4:3:2)体系 J。总之,HSCCC分离制备天然产物是很适合的,不但适用于极性化合物,同样适用于非极性化合物;既可用于天然产物粗提物的去杂,也可用于Z后产物的精制,甚至可一步得到纯品,当分析型的HSCCC的仪器转速达到2000r/rain以上,溶剂体系合适的情况下,分离速度可与HPLC相媲美。中药来自于天然植物或动物,HSCCC同样可以应用于中药的单味药有效成分或方剂的有效部分的分离。例如采用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(1:1:1:1)和氯仿/甲醇/水(4:3:2)体系分离何首乌的氯仿提取物得到大黄素和蜈蚣苔素(physcioue).分离其酒精提取物,得到1,2-二苯乙烯配糖物等。用乙酸乙酯/甲醇/水(50:1:50)分离何首乌干根的甲醇提取物,采用下相作流动相 ;用氯仿/甲醇/0.1 mol/L盐酸(4:1.5:2)分离制备黄连的生物碱,下相作流动相 ;用R134a/甲醇/水体系分离当归提取物,RliM-a作流动相,甲醇/水(65:30或70:30)作固定相;用氯仿/甲醇/水(4:3:2)分离银杏叶提取物得到4,5,7-三羟基黄酮醇,异鼠李亭,槲皮苷纯物质 。总之.HSCCC在中YF剂分离制备中尚属空白,因此开展HSCCC在这方面的工作有重要的意义。2.抗生素由于可以直接向HSCCC中进粗品,抗生素的分析和制备分离也采用HSCCC。进样量为1 mg一5 g。一般可用疏水性体系分离抗生素。对于未知样品,强极性组分用含有正丁醇的体系,中等疏水性体系用含有氯仿的体系,疏水性用含有正己烷的体系 。例如:用氯仿/氯化乙烯/正己烷/甲醇/水(1:1:1:3 5:1)体系分离道诺红菌素衍生物 .上相作流动相;用苯/氯仿,甲醇/水(15:15:23:7)分离依罗霉素( 娜in)混合物 ,进样量100mg,上相作流动相;用征己烷,甲醇/水(5:1:4:5)分离放线菌素(acting,vein)~合物 ,进样量达83 mg,上相作流动相;用氯仿/甲醇/水(4:4:3)体系分离杀念菌素(candicidin)衍生物 .进样量100 mg,上相作流动相;四氯化碳/甲醇/0.01 mol/L磷酸钾缓冲液(pH=7)(2:3:2)分离尼达霉素(niddamycins)混合物 .进样量100mg;用正己烷/L酸乙酯,甲醇/水(19:1:lO:lO)分离伊维菌素(ivermectin) ,进样量25 mg,下相作流动相;用氯仿/乙酸乙酯/甲醇/水(3:1:3:2)分离普那霉素(pristinamycins) 等等。3.蛋白质和肽用HSCCC分离制备蛋白或多肽的混合物Z近的进展主要取决于以下3种因紊 :采用低粘度的溶剂体系,溶剂体系大部分包含正丁醇;新型的pH区带提取逆流色谱的出现和发展;HSCCC与离子对逆流色谱的综合应用。后两种逆流色谱技术将在下面详述。例如:采用氯仿/苯/甲醇/水(15:15:23:7)分离短杆菌肽 ,进样量可达100 mg,上相作流动相;用氯仿/乙醇/水(5:4:3)或氯仿/乙醇/甲醇/水(5:3:3:4)分离杆菌肽(Baeitrlacin) ,进样量可达50mg;用正丁醇/O.03 mol/L三氟乙酸(1:1)分离黏菌素 ;采用正丁醇/二/0.1 mol/L甲酸铵(1:O.O1:0.01)、叔丁基甲基醚/乙腈/三氟乙酸(O.5% 一5%)(2:2:3)、叔丁基甲基醚/乙腈,三氟乙酸(1%)(2:2:3)或叔丁基甲基醚/正丁醇/乙腈/Z氟乙酸(1%)(2:2:1:5)等体系均可分离二肽混合物 ,进样量可达3∞ mg,下相作流动相;用正丁醇/0.2 mol/L甲酸铵(pH:8.5)(1:1,5o℃)或正丁醇/0.2mol/L甲酸铵(pH=9)(1:1)体系分离缩胆囊素。4.食品HSCCC应用于食品分离的Zda优势是粗品或复杂样品可直接进样,一般用于食品除毒去杂或制备生物活性物质。例如用HSCCC检测食品中的毒素含量,分离SEA(导致食品污染的常见毒素)[28];用正已烷/乙腈/叔丁基甲基醚(10∶10∶1)从香芹菜中分离falcarind和falcarindiel [29];糖和PNP衍生物用HSCCC正交螺旋管行星式离心分离,溶剂体系是正丁醇/乙酸/水(4∶1∶5)或正丁醇/甲醇/水(4∶1∶4).分离体系通过衍生可以增加分子的疏水性,从而用HSCCC实现分离。5.无机物HSCCC在分离无机物方面的应用主要集中于稀土元素或重金属元素。例如用混溶的0.5mol/LDEPHA (二乙基已基磷酸盐)和十二烷作固定相,盐酸作流动相,富集稀有元素;用盐酸和氯仿(溶有0.15mol/L DEPHA)(1:1)溶剂体系分离镧系元素Sm、Gd、Tb、Dy、Er、Yb,效果良好;用EHPA(乙基已基磷酸盐)和单-2-乙基已基醚的甲苯溶液体系作固定相,含有镧系元家如钬和铒的溶液(相当于流动相)从上洗脱,在固定相中金属元素富集,并发现了稀有元素的复合物的保留值与流动相的pH有较大关系, pH升高,保留体积提高,但是理论塔板数下降,另外,在流动相中加入铵盐并不影响固定相保留值。根据上述方法,HSCCC可用于环境分析检测或控制污染。虽然灵敏度较低,但是固定相能够富集干扰的金属离子。6.其它随着技术的发展,HSCCC应用范围逐步拓展。已经有人尝SYHSCCC拆分消旋化合物。例如N-十二烷酰-L-脯氨酸-3,5-二甲基苯胺,成功地用于氨基酸的衍生物的分离。有人用HSCCC分离紫胶染料,溶剂体系是叔丁基甲基醚/正丁醇/乙醇/水(2∶2∶1∶5),得到的物质纯度在95%左右。Ma和Ito发现增加有机固定相中手性选择性试剂的含量及增大溶剂系统的疏水性可提高色谱峰的分辨率。
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- 2006-04-24 17:14:54
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