紫外分光光度法测定蛋白质含量 1.1 仪器与试剂：

摘要：

考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白质定量测定方法。

1. 实验部分

Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；

牛血清蛋白；超纯水。

1.2 试液的制备：

牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备 称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。

考马斯亮兰G250试剂  称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。

2. 结果与讨论

2.1 校正曲线的绘制

 准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度

为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

2.2  精密度

配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。

表1 精密度测定结果

次数

1

2

3

4

5

6

RSD%

A

0.2626

0.2622

0.2620

0.2628

0.2629

0.2626

0.13

2.3  稳定性

取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。

表2 稳定度测定结果

时间（min）

A1

A2

A3

A平均

0

0.5511

0.5523

0.5516

0.5517

10

0.5204

0.5184

0.5168

0.5185

20

0.4910

0.4901

0.4903

0.4905

30

0.4765

0.4716

0.4721

0.4734

40

0.4524

0.4475

0.4440

0.4480

50

0.3982

0.3935

0.4031

0.3983

     该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。v