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- 【导读】 最常用的是:用细胞裂解液提取呀,最后你是要做含量测定还是啥的?含量测定酶标仪或紫外光度计。具体的方法很多你可以参考蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的...
Z常用的是:用细胞裂解液提取呀,Z后你是要做含量测定还是啥的?含量测定酶标仪或紫外光度计。
具体的方法很多你可以参考
蛋白质提取与制备
蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用
材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适
用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的,大部分蛋白质均
可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有
机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。蛋白质与酶在不同溶剂中溶
解度的差异,主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例,其次取决于这
些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子
强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。
将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性
的形式存在于体液(如血浆、消化硫等)中,可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的
角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物,如脂类、
糖类以及其他可溶性蛋白质,Z后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后,用
水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂,将蛋白质溶解出来,再用离心法除去不溶物,即得粗提取
液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH 用适当缓冲液控制时,共稳定性及
溶解度均能增加。如球蛋白类能溶于稀盐溶液中,脂蛋白可用稀的去垢剂溶液如十二烷基硫
酸钠、洋地黄皂苷(Digitonin)溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱
溶液抽提。
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- 2004-07-14 10:19:49
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