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- 【导读】 细胞冻存解决方案细胞冻存步骤:1.预先配制冻存液:10%DMSO+90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,...
细胞冻存解决方案细胞冻存步骤:
1.预先配制冻存液:10%DMSO+90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀。4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)Z好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。
解决方案:
1.冻存液:A:dmso推荐sigma(货号D2650-100ml)B:胎牛血清根据自己习惯1.DMSO不用高压灭菌;DMEM不能高压灭菌2.DMSO要用新的,而且要避光保存..3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(体积比)2.胰酶(hyclone货号sh30042.01)pbs(hyclone货号sh30256.01b)培养瓶,离心管推荐coring或者falcon枪头推荐axygen(axygen枪头已经基本国产化)3.冻存管推荐axygen的彩色冻存管,有各种颜色的盖子,方便分类。且性价比较高。目前市场上nunc和corning的一次性冻存管使用也很广泛,但如果量大不如axygen冻存管划算。现在还提供底部印有二维码的方便识别的冻存管。4.冻存盒:推荐使用biologix的纸质冻存盒,标注清晰,书写后不容易掉色,且有各种颜色可选。同时也有塑料冻存盒供使用。质量高,价格低。5.程序降温盒:推荐nalgene(货号5100-0001)。使用Z广,Z专业的程序降温盒。6.液氮罐:根据需求,1000个样本的储存空间,推荐金凤的yds-50b-125,含6个6层25孔方提桶,保护罩及一只真空安全帽,含不锈钢盒,Z多放900只样本。7.另外还有冷冻记号笔,不锈钢冻存盒架,细胞滤网,冻存管支架等等。
液氮罐使用注意事项:
1.容器的使用维护:充液氮前要用少量的液氮预冷;补充液氮的时机是液氮剩余量为总容量的1/3为宜;严禁在容器盖上放置物体和密封瓶口;严防敲击碰撞。2.不能用其他塞子代替专用罐盖,更不能密封塞子,以免液氮蒸发,压力,损伤容器;检查容器液面高度时,应用塑料小棒或实心小木棒插入底部,过5-10s后取出,结霜的长度即为液面高度。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-08-13 09:23:10
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