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ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)是酶免疫测定技术中应用Z广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
酶联免疫试剂盒的操作使用:
1、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。2、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。3、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。4、酶联免疫试剂盒每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。5、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。6、在450nm波长处测定各孔的OD值。
为保证实验质量,使用酶联免疫试剂盒时需注意:
(1)合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。(2)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。(3)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。(4)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-08-14 09:23:04
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