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- 【导读】本篇文章由专业生化试剂供应商索莱宝为您提供北京索莱宝公司提供,生物实验中对于蛋白研究,蛋白的来源通常分为细菌来源和组织或者细胞来源。1细菌蛋白提取:如果是细菌来源蛋白提取,通常将细...
本篇文章由专业生化试剂供应商索莱宝为您提供
北京索莱宝公司提供,生物实验中对于蛋白研究,蛋白的来源通常分为细菌来源和组织或者细胞来源。
1细菌蛋白提取:
如果是细菌来源蛋白提取,通常将细菌用蒸馏水溶解,然后直接超声波破碎就裂解了,只要菌液不是太浓,可以用超声波破碎的很清亮,低速离心取上清,即为细菌总蛋白,然后进行后续研究。
2,动物组织细胞蛋白提取:
北京索莱宝公司提供GXRIPA组织/细胞裂解液适用于动物组织细胞蛋白提取(货号:R0010)
规格:20ml/100ml
本产品配有一支PMSF(0.3ml/1.5ml)
保存:RIPA裂解液4℃保存,PMSF-20℃保存。
北京索莱宝公司蛋白提取使用说明:
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量,取每1mlRIPA加入10ulPMSF,使PMSF的Z终浓度为1mM。混匀备用(PMSF现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Westernblotting和免疫沉淀等操作。
注意事项:
本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠:此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
3.植物盒
4.全盒
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R0030非变性组织细胞裂解液
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PC0030Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
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- 2004-08-14 09:23:08
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