影响ELISA中非特异性显色的几大要点

影响ELISA试剂盒中非特异性显色的缘由许多，如试剂盒特异性、查验标本中含酶符号物的烦扰物，操作进程中的疑问。这篇文章就这一缘由作一简明剖析,以便能够经过以上办法把非特异显色降至低极限，然后行进检测的特异性，并得到更精确、牢靠的试验作用。查验标本中富含酶符号物的烦扰物

内源性烦扰物：类风湿因子(RF)、黄疸等，类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的本身抗体，大都为IgM类，能充任抗原成分与固相及酶标抗体反响，然后出现非特异性显色。黄疸血标本中常富含内源性过氧化物酶，如用辣根过氧化物酶为符号物，就有能够发作非特异性显色。

外源性烦扰物，常常因样品收集、储存、处置不妥构成如样品溶血，被细菌污染，标本凝聚不全等。溶血标本，红细胞溶解割裂，释放出血红素构成，而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本能够会添加非特异性显色。如有细菌污染，菌体中能够富含内源性HRP，有国内报导酶免HAg试剂检测溶血标本时可构成假阳性。如在冰箱中保管过久，其间的IgG可发作聚合，在直接法ELISA试剂盒中可使本底加深。因而，血标本在收集处置时应留心，在冰箱中保管不易过久。

包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是直接ELISA中，试剂的特异性取决于运用抗原的纯度。其时因为技能条件的绑缚，包被用抗原或的纯度不能够抵达1**%，所以有些非特异性显色不可避免，只能尽能够行进纯度特异性。其时运用的包被抗原通常为组成多肽抗原。包被的效价具有高亲和力和高特异性的包被抗体，是选择试剂特异性的重要方面。

ELISA试剂盒是ELISA中重要的一步，意图是关闭固相载体外表尚未被所占有的空位，削减后续进程中非特异性蛋白的烦扰。

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