GX液相色谱法测定吡拉西坦葡萄糖注射液的有关物质

吡拉西坦葡萄糖注射液是国家四类新药，为脑代谢改善药，用于脑动脉硬化症及脑血管意外所致的记忆和思维功能减退的ZL。其前期质量研究工作中没有涉及有关物质的检测和控制，为了保证生产和储备过程中产品的质量，笔者对吡拉西坦葡萄糖注射液有关物质进行了全面考察，现将结果报告如下。

1材料与方法

1.1材料仪器与试药：美国Agilent1100GX液相色谱仪；Agilem1100系列紫外多波长检测器、自动进样器、柱温箱、四元泵、真空脱气机，Agilent1100化学工作站；KQ3200超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；SYZ-550石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂）；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；吡拉西坦注射葡萄糖液（批号031021N、031022、031023）由本公司制剂室提供。

1.2实验方法与结果

1.2.1色谱条件色谱柱：ODS柱（5μm，4.6mm×150mm）；流动相：水；流速：1.3ml／min；紫外检测波长：220nm；柱温：25℃；进样量：2Oμl。

1.2.2流动相的选择和Z佳检测波长的选择（1）流动相的选择：曾选用甲醇-乙腈-水、甲醇-水等分离吡拉西坦，但主峰的保留时间较短，对主要降解产物5-羟甲基糠醛进行检测，发现与主峰分离不完全，影响主药含量测定，故改用水作流动相进行检测，在此条件下，5-羟甲基糠醛保留时间约在2min，而主药的保留时间约在11min并对专属性进行考察，破坏试验的降解产物保留时间均不影响主药的含量测定。杂质峰可得到较好地分离和检测。（2）检测波长的选择：吡拉西坦在含量测定浓度下，在2OO～400nm的紫外扫描图显示，其在220.5nm处有Zda吸收，故选择220nm。

1.2.3辅料影响试验精密称取葡萄糖5.0g置100ml量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，制成与吡拉西坦葡萄糖注射葡萄糖浓度相当的溶液；取此溶液1ml置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2Oμl注入液相色谱仪，记录HPLC检测图谱，结果表明：在选定的液相色谱条件下量的葡萄糖对测定无干扰。

1.2.4专属性试验（1）高温破坏；分别称取吡拉西坦原料160mg2份于5Oml量瓶中，1份在120℃烘烤2.5h，加水溶解，稀释至刻度，摇匀，进行HPLC检测；主要降解产物保留时间约为2.0min。另1份加水溶解，稀释至刻度，摇匀，在6O℃加热4h，进行HPLC检测，主要降解产物保留时间约为2.0min，检测结果降解产物与主药分离较好，互不干扰测定。（2）酸破坏：称取吡拉西坦原料160mg于5Oml量瓶中，加0.1mol／LHCL溶液1ml，溶解，在60℃加热2h，加水稀释至刻度，摇匀，进行HPLC检测，主要降解产物的保留时间约为4.2min，检测结果降解产物与主药分离较好，互不干扰测定。（3）碱破坏：称取吡拉西坦原料160mg于5Oml量瓶中．加0.1mol／1Na0H溶液1ml，溶解，在6O℃加热2h，加水稀释至刻度，摇匀。进行HPLC检测。主要降解产物的保留时间约为2.1min和2.4min，检测结果降解产物与主药分离较好．互不干扰测定。（4）氧化破坏：称取吡拉西坦原料160mg于5Oml量瓶中，加3O%H2O2溶液0.1ml，溶解，在60℃加热0.5h，加水稀释至刻度，摇匀，进行HPLC检测，主要降解产物的保留时间约为2.0min和2.4min，检测结果降解产物与主药分离较好，互不干扰测定，并说明吡拉西坦极易被氧化。

1.2.5测定方法回收率试验取乙酰胺毗咯烷酮对照品约26、32、38mg，精密称定，分置于1Oml量瓶中，并按比加入葡萄糖，用水溶解，稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液，浓度分别为26μg／ml、32μg／ml、38μg／ml；另精密称取乙酰胺吡咯烷酮对照品适量，用水配制成浓度为32μg／ml的对照溶液。分别精密吸取上述样品溶液和对照溶液2Oμl。注入色谱仪，记录峰面积，计算回收率。结果表明在99.9～100.1之间，并且RSD值均小于0.5。

1.2.6样品的有关物质测定精密量取本品1ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液；精密移取1ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液2Oμl注入液相色谱仪进行预试，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰达满标的1O％～2O％；再精密量取供试液2Oμl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，计算各杂质峰面积的和，不得大于对照峰面积（1％）。

2讨论

在方法专属性考察中，主要降解产物的保留时间约为2.0、2.1、2.4和4.2min，降解产物与主药分离较好，互不干扰测定，但目前尚未确定各降解产物的成分，这方面工作将进一步进行研究。在专属性考察中发现，吡拉西坦极易被氧化，所以在检验操作中应予以注意。

【参考文献】

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会．ZG药典[3]．Ⅱ部．北京化学工业出版社，2000．附录：191．

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