植物蛋白Z（Protein Z）elisa试剂盒,植物蛋白Z（Protein Z）试剂盒说明书

植物蛋白Z（ProteinZ）elisa试剂盒,植物蛋白Z（ProteinZ）试剂盒说明书

植物蛋白Z（ProteinZ）elisa试剂盒,植物蛋白Z（ProteinZ）试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：                                                         96T
2ng/L-50ng/L
植物蛋白Z（ProteinZ）elisa试剂盒,植物蛋白Z（ProteinZ）试剂盒使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中蛋白Z（ProteinZ）含量。
植物蛋白Z（ProteinZ）elisa试剂盒,植物蛋白Z（ProteinZ）试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物蛋白Z（ProteinZ）水平。用纯化的植物蛋白Z（ProteinZ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白Z（ProteinZ），再与HRP标记的蛋白Z（ProteinZ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白Z（ProteinZ）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物蛋白Z（ProteinZ）浓度。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（96ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
植物蛋白Z（ProteinZ）elisa试剂盒,植物蛋白Z（ProteinZ）试剂盒标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
24ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
12ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
6ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
3ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
 

计算
 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间Z好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔diyi孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月

Plantapoprotein（apo-A1）

FORRESEARCHUSEONLY

Assayrange：0.2μg/mL-8μg/mL               96determinations
Purpose
Thiskitallowsforthedeterminationofapo-A1concentrationsinPlanttissue,cellandothersamples.
Principleoftheassay
ThekitassayHumanapo-A1levelinthesample，usePurifiedHumanapo-A1antibodytocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddapo-A1towells,Combinedapo-A1antibodywhichWithHRPlabeled,becomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofHumanapo-A1inthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.
Materialsprovidedwiththekit
1 wash solution 20ml×1bottle 7 StoppSolution 6ml×1bottle
2 HRP-Conjugatereagent 6ml×1bottle 8 Standard（16μg/mL） 0.5ml×1bottle
3 Microelisastripplate 12well×8strips 9 Standarddiluent 1.5ml×1bottle
4 Samplediluent 6ml×1bottle 10 Instruction 1
5 ChromogenSolutionA 6ml×1bottle 11 Closureplatemembrane 2
6 ChromogenSolutionB 6ml×1bottle 12 Sealedbags 1
Specimenrequirements
1. extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevantliterature,and首ldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcan’t,specimencanbekeptin-20℃topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
2. Can’tdetectthesamplewhichcontainNaN3,becauseNaN3inhibitsHRPactive.
Assayprocedure
1. Diluteandaddsample:DiluteOriginaldensityStandardasfollowtable:
8μg/mL 5Standard 150μlOriginaldensityStandard+150μlStandarddiluent
4μg/mL 4Standard 150μl5Standard+150μlStandarddiluent
2μg/mL 3Standard 150μl4Standard+150μlStandarddiluent
1μg/mL 2Standard 150μl3Standard+150μlStandarddiluent
0.5μg/mL 1Standard 150μl2Standard+150μlStandarddiluent
2.addsample：Setblankwellsseparately（blankcomparisonwellsdon’taddsampleandHRP-Conjugatereagent,othereachstepoperationissame）.testingsamplewell.addSampledilution40μltotestingsamplewell,thenaddtestingsample10μl（samplefinaldilutionis5-fold）,addsampletowells,don’ttouchthewellwallasfaraspossible,andGentlymix.
3.Incubate:AfterclosingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor30minat37℃.
4.Configurateliquid:30-fold（or20-fold）washsolutiondiluted30-fold（or20-fold）withdistilledwaterandreserve.
5.washing：UncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoeverywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.
6.addenzyme：AddHRP-Conjugatereagent50μltoeachwell,except blankwell.
7.incubate：Operationwith3.
8.washing：Operationwith5.
9.color：AddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor15minat37℃
10.Stopthereaction：AddStopSolution50μltoeachwell,Stopthereaction（thebluecolorchangetoyellowcolor）.
11.assay：takeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin15min.
Stepsdescription
Standard,Samplediluent

AddStandard,Samplediluent,incubatefor30minat37℃.

Wash5time,AddHRP-Conjugatereagent,incubatefor30minat37℃.

Wash5times,AddChromogenSolutionAandB,incubatefor30minat37℃.

AddStoppSolution

Readabsorbanceat450nmwithin15min

calculate
Calculate
Takethestandarddensityasthehorizontal,theODvalueforthevertical,drawthestandardcurveongraphpaper,FindoutthecorrespondingdensityaccordingtothesampleODvaluebytheSamplecurve,multipliedbythedilutionmultiple,orcalculatethestraightlineregressionequationofthestandardcurvewiththestandarddensityandtheODvalue,withthesampleODvalueintheequation,calculatethesampledensity,multipliedbythedilutionfactor,theresultisthesampleactualdensity.
Importantnotes
1. Thekittakesoutfromtherefrigerationenvironment首ldbebalanced15-30minutesintheroomtemperature,ELISAplatescoatedifhasnotuseupafteropened,theplate首ldbestoredinSealedbag.
2. washingbufferwillCrystallizationseparation,itcanbeheatedthewaterhelpsdissolvewhendilute.Washingdoesnotaffecttheresult.
3. addSamplewithsamplerEachstep,Andproofreaditsaccuracyfrequently,avoidstheexperimentalerror.addsamplewithin5min,ifthenumberofsampleismuch,recommendtouseVolley.
4. ifthetestingmaterialcontentisexcessivelyhigher（ThesampleODisbiggerthanthefirststandardwell）,pleasediluteSample（n-fold）,Pleasediluenteandmultipliedbythedilutionfactor.（×n×5）.
5. Closureplatemembraneonlylimitsthedisposableuse,toavoidcross-contamination.
6. Thesubstrateevadethelightpreservation.
7. Pleaseaccordingtouseinstructionstrictly,Thetestresultdeterminationmusttakethemicrotiterplatereaderasastandard.
8. Allsamples,washingbufferandeachkindofreject首ldaccordingtoinfectivematerialprocess.
9. Donotmixreagentswiththosefromotherlots.

Storageandvalidity
1．Storage： 2-8℃.
2．validity：sixmonths