微生物培养基的配制方法以及常见培养基的成分

微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。微生物培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。下面我们来介绍一下基本微生物培养基的配制方法。

微生物培养基的配制

溶化：

一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内.加入蒸馏水,隔水加热以促其溶解,加热时应经常搅拌,防止焦结,待其溶解后补足水分.

在使用干燥培养基时,先将蒸馏水按定量加入容器中,然后称取一定量培养基干粉放入水中,静置1015min,搅拌,振荡,或延长时间以促进溶解,一般不要热,必要时加热,但时间不宜过长,温度不宜过高,避免某些营养成分被破坏.

校正酸碱度（调节pH）：

培养基必须有适当的pH.因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一,测定pH的标准温度为25士2℃.调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液.当调节缓冲液的pH时,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液.灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低,一般高压灭菌前培养基的pH会比Z终pH调高0.2左右,灭菌后基本合适.因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定,并记下每次pH的测定结果,有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性,从而指导灭菌前pH的调节.干燥培养基一般已校正过pH,用时也必须再验证.测定时,一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化,或用pH计校正,如与所需pH不符,可用以上的酸或碱液加以校正.调整pH后要加热过滤,使培养基澄清.

培养基的灭菌：

培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定.普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min,但容器和装量较大时,应延长至20min.含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min.含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80100℃、30min,连续3d,间歇灭菌.血清或组织液,采用低热5658水浴1h,连续56d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤CJ.高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到全部杀灭微生物.以上的灭菌时间和温度要经过验证确认,如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。

常见培养基的成分

1．营养肉汤

成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。

制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。

2．营养琼脂培养基

成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。

制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。

3．MRS培养基

成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4??2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温801mL，MgSO4.7H2O0.58g，MnSO44H2O0.25g，（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。

制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。

4．脱脂乳培养基

成分：牛奶，蒸馏水。

制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，冷却，脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。

5．培养基A

成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。

6．PTYG培养基

成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温8001mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。

制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。

盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4??1.0g，KH2PO4??1.0g，MgSO4。7H2O0.48g，NaCO310g，NaCL2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。

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