BL21（DE3）pLysS感受态细胞说明书

BL21(DE3)pLysSCompetentCell

BL21(DE3)pLysS感受态细胞

目录号：YJ0810

保存条件：-80℃保存。

组分说明

Cat.No.YJ0810A

Size10×100μl

BL21(DE3)pLysSCompetentCell10×100μl

ControlDNApUC19，0.1ng/μl10μl

产品简介

　　本产品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用

于DNA的热击转化。该菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，适合表达毒性蛋白和

非毒性蛋白。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，

但不干扰目的蛋白的表达。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

上海研谨生物ZG高端生物试剂生产商

注意事项

1．感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可多次冻融和放

置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2．转化所有步骤均在无菌条件下操作。

3．包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

操作步骤

1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50μl感受态细胞为例。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量

的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻

轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃

摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体

琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，

倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意：1）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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