石蜡包埋对dna甲基化有影响吗

从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤，是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而业。Goelz等（1985）Z先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术，是用机械的方法破碎组织，切除多余的石蜡，进入含SDS和高浓度蛋白酶K（1mg/ml）的提取缓冲液加温孵育，然后进行苯酚和氯仿抽提。 所得DNA虽不完整，但可被限制性内切酶切割，因而适于点杂交，印迹杂交等多种分了生物学实验。

Dubeau等（1986）在上述方法上作了改进。 首先通过组织切片和二甲苯和脱蜡，保证了组织的完全破碎，使细胞与消化液充分接触，使DNA释放和蛋白去除更加完全；其次通过两步消化的方法，将不适于做分子杂交的降解的DNA小段去除，仅保留那些可螺旋化的完整的DNA分子，从而提DNA质量，适于做Sorthern印迹杂交分析。Moerkerk等（1990）对上述两种方法进行了比较，发现两种方法所提行DNA之点杂交结果一致，非螺旋化DNA亦不影响杂交分析。

Goelz氏DNA提取方法的主要步骤

1. 切除多余石错，暴露组织

2. 将组织切碎（Z大径<0.5mm），称重；

3. 溶于TE9提取液(组织<50mg/5ml.50－500mg/10ml)，高速混悬2－3min，于48℃放置24h（TE9提取液的制备；500mmol/L Tris；20mmol/L EDTA；10mmol/L NaCl；1% SDS；500µg/ml 蛋白酶K；pH8.0）

4. 再次混悬组织，加入蛋白酶K至终浓度1mg/ml，SDS至2%，孵育40h；

5. 用等体积酚－氯仿溶液抽提3次；

6. 2.5倍体积乙醇沉淀DNA

7. -70℃放置2－4h

8. 9 000xg离心1h

9. 沉淀物用70%乙醇洗1次

10. 干燥，TE（pH7.2）溶解。