Western Blot所用试剂汇总

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

Western Blot所用试剂汇总

主要试剂 1 丙烯酰胺和N，N-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%
主要试剂
1 丙烯酰胺和N，N-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml)储于棕色瓶，4避光保存严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制如有沉淀，可以过滤
2 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存
3 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积过滤后40C保存
4 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积过滤后40C保存这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris.CL
5 TEMED原溶液N，N，NN四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合PH太低时，聚合反应受到YZ10%(w/v)过硫酸胺溶液提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基去离子水配制数ml，临用前配制.
6 SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100g
7 Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/L Tris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液临用前稀释10倍
8 转移缓冲液：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸5.8gTris碱0.37g SDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L
9 丽春红染液储存液：丽春红S 2g 三30g 磺基水杨酸 30g 加水至100ml 用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液使用后应予以废弃
10 脱脂奶粉5%(w/v)
11 NaN3 0.02% 叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)
12 Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl
13 Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1
14 过氧化物酶标记的第二抗体
15 NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)
16 BCIP(溶于1**%二甲基甲酰胺，50mg/ml)
17 100mmol/LTris-HCL(pH9.5)
18 100mmol/L NaCl
19 50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/L EDTA