切向流过滤：血红蛋白纯化

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

在现代医学中，输血是出血性休克贫血等病症重要的ZL方法，也是常规手术的重要组成部分，但是肝炎及AIDS等小概率传播风险，总是干扰着输血的安全进行此外，输血前，还需对供体血液进行分型，并与受体血型交叉匹配，以避免出现排异现象对此，一种相对简便的替代方法是，使用血红蛋白（Hb）类氧载体（HBOCs）取代供体红细胞（RBCs），其具有以下优点：首先，由于HBOCs表面没有血型抗原，一般不会引起排异现象；其次，在Hb纯化过程中灭活并清除了病毒，所以大大降低了血源性疾病传播的可能性

Hb通常从人或牛RBCs（hRBCs或bRBCs）中提取对纯化的Hb进行化学修饰是HBOCs合成的一种主要途径，化学修饰型HBOCs可以通过分子内交联Hb聚合Hb或将聚合物结合到Hb表面的方法来完成Hb也可以包埋到固体或中空颗粒内部，以形成非化学修饰型HBOCs

从裂解的RBCs中提取并纯化Hb前，需先去除血液中的白细胞血小板及血浆成分，可先离心并漂洗血液，以分离血浆和白细胞层所得的RBCs再用低渗溶液孵育裂解

从RBC裂解液中纯化Hb的方法有很多种，包括有机溶液萃取以及离子交换色谱分离色谱方法又可以大体归类为吸附方法（Hb被截留在固相介质内，然后溶剂洗脱）或直流方法（杂质被截留，而Hb被洗脱）直流方法消除了吸附和洗脱过程，但与吸附方法相比，所得的Hb纯度较低但两者都受到血细胞裂解方法及裂解状态的影响

在还原剂存在的绝氧条件下进行加热，也可以进行Hb的纯化在该过程中热敏感性蛋白选择性沉淀，而病毒被灭活，但Hb也有可能因为高温而失活，所以需要添加稳定剂，以防止Hb变性

微滤和超滤也是Hb纯化的常用技术，可有效降低Hb溶液中的病毒载量但是常规的过滤技术通常需要配合化学修饰和分馏操作，以从未修饰型Hb和其它杂质中分离修饰型Hb，且由于细胞碎片堵塞膜孔，造成流速降低针对这些问题，本文将介绍一种多阶段式过滤方法在该方法中，大多数细胞碎片在**阶段（膜MWCO 50nm）被清除，然后连续过滤，逐步清除较大的细胞碎片和分子该技术相对简单，且可同时进行Hb的纯化和浓缩 KrosFlo 研发用 IIi 切向流过滤系统