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水稻苗中苯丙氨酸解氨酶(PAL)的应用方案

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概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单

原理

苯丙氨酸解氨酶是植物次生代谢中的一个关键酶。它催化 L-苯丙氨酸的脱氨反应. 释放氨而形成反式肉桂酸。根据产物反式肉桂酸在波长 290 nm 处吸光度的变化,可以测定该酶的活性。

材料与仪器

UV-1800紫外可见分光光度计、冷冻高速离心机,旋涡混合器,恒温水浴锅等

材料:黄化水稻幼苗

试剂:0. 1 mol / L硼酸缓冲液(pH 8. 8);0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸:称取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸缓冲液(pH 8. 8);7 mmol - 統基乙醇硼酸 缓冲液:0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸缓冲液溶解,并定容至 200 mL;聚乙烯毗咯 烷酮(PVP)。

实验步骤

酶液制备称取黄化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 预冷的提取液(即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸缓冲液)、过量的聚乙烯毗咯烷酮(PVPX 但不能太多,否则不易研磨)、少量石英 砂在冰浴下研磨成浆,再加 3.5 mL 预冷的提取液使其终体积为 5 mL。于 12 000 g 4°C 下离心15 min, 用吸管吸取上清液,即粗酶液。


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