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保留弱、分离度不佳、峰形差!挑战极性化合物分析,整体解决方案……

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内容节点
概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单

在高效液相色谱分析中,使用反相色谱柱可解决80%以上问题。而反相色谱柱中,使用最多的是C18柱。


然而,色谱分析检测的时,总是会碰到极性大的样品,实在让人很头疼,一直是分析检测领域面临的挑战和难题,经常遇到检测灵敏度低、保留弱、分离度不理想、峰形不佳等问题。


如何解决极性化合物分离问题?常见的解决办法有哪些?


一般极性化合物


       对于一般极性的化合物使用C18即可解决,C18色谱柱我们平时使用最广泛,操作简便,可提供的厂家、品牌最多,选择范围也很大,同时色谱柱平衡迅速,也可兼容MS。对于一般极性化合物,检测工作者可轻松解决。关键选择一款分离度好,寿命长,性价比高的色谱柱即可。


Chromegabond WR C18(满足您最具挑战分析需求)

品牌:PerkinElmer色谱柱(原ES Industries,2021年收购)


  • Chromegabond(简称:CMB) WR C18是一种通过多步法生产的高碱性去活性固定相;

  • 特殊键合处理,具有高度疏水性和极高惰性,可用于酸类和碱类化合物的分析;

  • 可用于分离含有极性基团和疏水基团的分子,也特别适合分离胺类和酸类化合物。


       此外,氨基柱色谱柱家族中最灵活的色谱柱,虽然分类上是正相固定相,却可在正相、反相、离子交换或 HILIC 模式下使用。可用于极性化合物的正相分析,弱阴离子交换以及含水的反相液相分析。氨基柱被广泛应用于木糖、乳糖、葡萄糖等糖类的反相分析模式中。


Chromegabond Amine(NH2)(卓越、经久耐用的氨基色谱柱)

品牌:PerkinElmer色谱柱(原ES Industries,2021年收购)


  • Chromegabond Amine是一种与硅胶键合的聚合物氨基相;

  • 应用包括 HILIC、弱酸和糖;

  • Chromegabond 键合技术可生产出性能卓越、经久耐用的色谱柱。


CMB WR C18应用案例:西洋参中人参皂苷的测定

人参叶中两种人参皂苷(人参皂苷Rg1、人参皂苷Re)的分离检测的波长较低(203nm),且两种皂苷保留性差异不大,对色谱柱的分离性能是较大挑战。本实验按照中国药典2020版方法,使用CMB WR C18色谱柱对人参供试品中3种人参皂苷进行检测,主要难点在于Rg1和Re满足分离度要求,同时Rb1需要与相邻杂质有效分离。


结果表明在上述实验条件下,供试品中理论塔板数以人参皂苷Rg1计,理论塔板数66,468,远远大于药典要求(N>6000),与Re的分离度可达2以上,Rb1与基质中的相邻杂质也可以达到有效分离。

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中强极性化合物


       对于中强极性化合物,如果能在反相上保留,可选择亲水反相色谱柱,亲水反相色谱柱是在C18柱上键合或嵌合的极性基团,从而能够与极性化合物进行相互作用,从而增强对极性化合物的保留,另外,这类C18柱通常都能耐纯水相,减少流动相中有机相的比例,也能在另一方面增加极性化合物的保留。


Epic Polar (专为极性分析物保留而设计的高密度填料)

品牌:PerkinElmer色谱柱(原ES Industries,2021年收购)


  • 专为极性化合物特别设计的高密度填充的色谱柱,即使在 100% 水性流动相中,也能与键合的碳氢化合物相发生充分相互作用;

  • 在这些高度水性条件下,我们的独有的新型键合化学技术允许键合链在流动相中保持完全伸展;

  • Epic Polar 可以保留高水溶性化合物,如小分子有机酸、水溶性维生素、嘌呤和嘧啶、儿茶酚胺等极性化合物。


应用案例:

使用Epic Polar (100 x 4.6 mm, 3 μm) 对儿茶酚胺及相关化合物进HPLC 分析。儿茶酚胺及相关化合物由于极性大,在极短时间(3 min)内出峰,容易出现分离度差,峰形不佳等问题。Epic Polar能实现儿茶酚胺及相关化合物的较好分离。

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强极性化合物


       对于强极性化合物在反相上无保留,正相上不溶解。这时可使用HILIC色谱柱,PerkinElmer色谱柱(原ES Industries,2021年收购)拥有各种HILIC模式的色谱柱,满足您各种HILIC分离的需求。


      许多市售 HILIC 固定相都是转化的正相色谱柱,导致方法不理想、分离能力较低且缺乏耐久性。我们的HILIC 色谱柱系列包括新款 Epic HILIC POH,专为 HILIC 色谱分析而设计,可以实现高性能分离,获得可靠方法, 并提供较长的色谱柱寿命。


Epic HILIC POH(新型HILIC固定相)

  • 其由多羟基聚合物涂层覆盖并键合到硅胶;

  • 该聚合物涂层可以增强固定相在 HILIC 操作条件下的行为;

  • 可提供远高于常规羟基和二醇型固定相的羟基含量。


Epic HILIC RP(新型HILIC固定相)

  • 采用经过严格尺寸控制的超纯硅胶;

  • 可用于极性碱化合物的分离,其可与硅烷醇发生离子交换,从而能够保留这些极性碱。


Epic HILIC RP(HILIC 和反相色谱的新型固定相)

  • 它是含有极性和疏水性分析物的样品的极佳选择;

  • 可以实现高性能分离,获得可靠方法,色谱柱寿命也较长。


Epic HILIC PI(新型HILIC固定相)

  • 与硅胶键合的芳香胺基固定相组成。

  • 为极性胺化合物提供了优异的保留能力和峰形,也可以为酸类化合物提供优异的保留能力。


Epic HILIC FL(新型HILIC固定相)

  • 其由与硅胶键合的氟化基固定相组成;

  • 该组合物为极性卤代物、极性胺和极性芳香族化合物提供出色的保留能力和峰形。


应用案例:

使用Epic HILIC RP (250 x 4.6 mm, 5 μm) 对苯二氮䓬类进行HPLC分析


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