解锁GB 31658.22-2022前处理难题，迪马送您两个优化方案！

动物性食品中

β-受体激动剂残留量的检测

　　β-受体激动剂能促进脂肪分解，抑 制脂肪沉淀，显著提高酮体的瘦肉率，因此曾被用作畜禽的促生产剂。但这类药物易在动物体组织内残留，通过食物链进入人体，引起食物中毒。我国自2002年起，已经将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等列为禁用药品，并列入年度例行监测计划。

　　GB 31658.22-2022于2023年2月1日开始实施，同时，2023年食品安全监督抽检实施细则中畜禽肉及副产品项下以将此标准作为检验依据及指定检测方法。目前，部分客户反馈方法的前处理过程需要经过溶剂萃取、固相萃取两个净化步骤，略显繁琐。

　　迪马科技秉承以客户需求为中心的服务理念，在标准的基础上，开发出两套解决方案，致力于简化前处理流程。两套方案均可减少样品检测时间，提高客户工作效率，可供广大客户参考。

优化方案一：保留溶剂萃取步骤，将固相萃取净化改为更加快速的QuEChERS净化；

优化方案二：去除溶剂萃取步骤，优化固相萃取淋洗过程。

优化方案一1、适用范围

　　本方案适用于猪肉、猪肝中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特、羟甲基克仑特罗共18种β-受体激动剂单个或混合物残留量的检测。

2、标准品配制

(1) 混标储备液：精密称取适量克伦特罗等标准品，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为100μg/mL混标储备液(Cat.#: 47936)。

(2) 混标中间液Ⅰ：准确吸取适量混标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL混标中间液。

(3) 混标中间液Ⅱ：准确吸取适量混标中间液Ⅰ，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.01μg/mL混标中间液。

(4) 内标储备液：精密称取适量克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西马特罗-D7、齐帕特罗-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特罗-D9、盐酸马布特罗-D9、盐酸班布特罗-D9、克仑丙罗-D7、盐酸妥布特罗-D9、羟甲基克仑特罗-D6，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为10μg/mL内标储备液。

(5) 内标工作液：准确吸取适量内标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL内标工作液。

3、提取

(1) 称取样品2.0g于50mL塑料离心管中，加6mL　0.2mol/L乙酸铵缓冲液、40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，37℃避光水浴16h，放置室温，备用。

(2) 取备用液，加100μL内标工作液，涡旋混匀，8000rmp离心8min，取出上清。

(3) 向下层残渣加入5mL 0.1mol/L高氯酸溶液，涡旋5min, 8000rmp离心8min，取上清,与步骤(2)上清混匀，用高氯酸调pH值至1.0±0.2，8000rmp离心8min，取出上清。

(4) 将上清液用10mol/L NaOH溶液调pH值至10.0±0.5。

(5) 加乙酸乙酯15mL，涡旋5min, 5000rmp离心5min，取上层有机相。

(6) 下层水相中再加入10mL叔丁基甲醚，涡旋5min, 5000rmp离心5min，取上层有机相。

(7) 合并两次有机相，混匀，50℃水浴氮吹至干，用5mL 2%甲酸溶液超声1min，涡旋1min溶解残渣，备用。

注：0.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g，,溶解于1000mL水中，用乙酸调pH值至5.2；

0.1mol/L高氯酸溶液：取高氯酸8.7mL，用水稀释至1000mL。

4、净化

ProElut QUE PLS-A  (Cat.#: 64704)

　　将备用液全部转移到ProElut QuEChERS净化管中，涡旋2min, 8000rmp离心2min，上清液过尼龙膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

５、分析条件

UPLC条件

色谱柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱温：35℃

流动相：A: 0.1% 甲酸水溶液　B: 0.1% 甲酸乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

６、添加回收结果

优化方案二1、适用范围

　　本方案适用于猪肉、猪肝中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特、羟甲基克仑特罗共18种β-受体激动剂单个或混合物残留量的检测。

2、标准品配制

(1)混标储备液：精密称取适量克伦特罗等标准品，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为100μg/mL混标储备液(Cat.#: 47936)。

(2) 混标中间液Ⅰ：准确吸取适量混标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL混标中间液。

(3) 混标中间液Ⅱ：准确吸取适量混标中间液Ⅰ，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.01μg/mL混标中间液。

(4) 内标储备液：精密称取适量克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西马特罗-D7、齐帕特罗-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特罗-D9、盐酸马布特罗-D9、盐酸班布特罗-D9、克仑丙罗-D7、盐酸妥布特罗-D9、羟甲基克仑特罗-D6，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为10μg/mL内标储备液。

(5) 内标工作液：准确吸取适量内标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL内标工作液。

3、提取

(1) 称取样品2.0g于50mL塑料离心管中，加6mL　0.2mol/L乙酸铵缓冲液、40μLβ-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，37℃避光水浴16h，放置室温，备用。

(2) 取备用液，加100μL内标工作液，涡旋混匀，8000rmp离心8min，取出上清。

(3) 向下层残渣加入6mL　0.2mol/L乙酸铵缓冲液，涡旋5min, 8000rmp离心8min，取出上清,并与步骤(2)的上清合并。

(4) 向上清液中加入10mL正己烷，涡旋5min, 8000rmp离心2min，弃去上层，下层水相备用。

注：0.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g，溶解于1000mL水中，用乙酸调pH值至5.2。

4、净化

ProElut PXC 200mg/6mL (Cat.#: 68212)

(1)活化：用5mL甲醇和5mL水活化小柱。

(2)上样：将备用液全部上柱，弃去流出液。

(3)淋洗：用5mL水、5mL 2.5%甲酸水溶液、3mL 0.1%氨水甲醇淋洗小柱，弃去流出液，推干。

(3)洗脱：用6mL 2.5%氨水甲醇洗脱小柱，推干，接收流出液，混匀。

(4)重新溶解：将流出液在50℃水浴氮吹至近干，先用0.1mL甲醇溶解残留物，再加入0.9mL甲醇-0.1%甲酸水(1:9)，混匀，过尼龙膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

５、分析条件

UPLC条件

色谱柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱温：35℃

流动相：A: 0.1% 甲酸水溶液　B: 0.1% 甲酸乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

６、添加回收结果

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