氨基酸分析仪是一种分析仪器,采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法,对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)。
氨基酸分析仪工作原理
测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同,在阳离子交换柱上将它们分离,采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来,再逐个以另yi流路的茚三酮试剂混合,然后共同流至螺旋反应管中,于一定温度下(通常为115~120℃)进行显色反应,形成在570nm有Z大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,其Z大吸收在440nm。
氨基酸分析仪系统分类
通常细分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次Z多分析约25种氨基酸,速度较快,基线平直度好;锂盐系统一次Z多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。
氨基酸分析仪优缺点
优点
1.分析可以再设备普通的实验室里进行
2.能够分析大量的样品。因为通过仔细的计划,好几批试样可以同时分析以及为分析做好准备
3.原始数据能够容易的处理以供在计算机中进一步求值
4.检测极限也从Z初的u mol, 级提高到p mol 级
5.氨基酸不用柱前衍生,直接上样进行分析,操作步骤简单,故是迄今氨基酸定性、定量分析中应用Z广泛的方法之一。柱后衍生试剂除茚三酮外,还有可用荧光检测的邻苯二甲醛,使检测灵敏度得以提高。
缺点:
1.由于仪器结构复杂,造成价格昂贵;
2.离子交换树脂易压缩,流动相流速的加快不与压力的增加成比例,故测定时间相对较长;
3.氨基酸经离子交换柱分离,在柱后与水合茚三酮衍生剂混合进行反应,势必造成柱后扩散比较大,峰形变宽,分辨率降低;
4.有些柱后衍生剂如邻苯二甲醛虽能用灵敏的荧光检测,但不能与亚氨基反应,故不能检测脯氨酸。
氨基酸分析仪应用举例
(一)医学上的应用
氨基酸代谢异常角度阐述了氨基酸与肝性脑病的关系
血清中11种游离氨基酸的降低可直接影响人体组织的正常发育、生长
必需氨基酸在创伤愈合中的关系
肿瘤组织氨基酸代谢的变化规律
(二)饲料上的应用
质量控制:各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当,测定原料和产品中的氨基酸含量,以达到保证质量的目的。
真伪鉴别:鱼粉氨基酸组成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高,氨基酸分析结果很容易就可以辨别真伪。
(三)农业、食品、饮料及其它
对玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测
对果汁、饮料进行真伪的鉴别
检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶
对酱油级别的认定
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