酶标仪即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的Z终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
酶标仪原理
酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本。该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号。电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,Z后由显示器和打印机显示结果。 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程。而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单。
酶标仪用途
可广泛应用于低紫外区的DNA、RNA定量及纯度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶动力学检测,酶联免疫测定(ELISAs),细胞增殖与毒性分析,细胞凋亡检测(MTT),报告基因检测及G蛋白偶联受体分析(GPCR)等。
分光光度计和酶标板区别
(1)盛装待测溶液的容器:
分光光度计用的是比色皿,酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用,每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,因此用它作为固相载体,酶标板通常为48孔或96孔,每个微孔可以盛装不同的溶液。
(2)光路的方向:
分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。
(3)光路的长度:
由于光密度(OD值)与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。
分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm,所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。
而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。
酶标仪注意事项
仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。
仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。
为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。
操作环境温度应在15℃~40℃之间,环境湿度在15%~85%之间。
操作时电压应保持稳定。
操作环境空气清洁,避免水汽、烟尘。
保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。
使用移液器加液,移液枪头不能混用。
洗板要干净,避免交叉污染。
严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。
请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成注意做好清洁工作。
不要在测量过程中关闭电源。
对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到Z佳效果。
使用后盖好防尘罩。
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