用Ni亲和层析柱纯化His标签融合蛋白时需要注意哪些事项

yangtzg52 2016-09-29 10:29:46 618 浏览

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寒烟残雪入红尘 2016-09-29 21:06:38

使用Ni柱纯化带有His标签的融合蛋白，是我们大家再熟悉不过的实验操作了.我们对整个操作的流程及注意事项，很可能是师从兄师姐那里获得的.这些经验都是大家智慧的结晶.同时，这也有一定的不足之处，那就是我们学习到的是局部，还有一些我们不常用或者基本不会接触到的面儿，那些知识我们应该从哪里掌握呢? 给大家推荐一个办法，那就是参考那些大公司的实验手册.一般像GE、Qiagen等知名公司，都有Ni柱柱材料的产品，因此关于柱材料的各种性质参数，以及使用方法和注意事项都有详细的说明. 下面我就列举一些我从这些实验手册里总结出来的一部分Tips，仅供参考. 1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如：NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等； 2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等； 3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，比如DTT，防止二价Ni被还原； 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失； 5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶YZ剂，比如0.1-1mM的PMSF，防止目的蛋白被降解； 6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度Z高可达50%（v/v） 7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质； 8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间； 9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍（Z高可6M），尿素（Z高可8M） 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，Z高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染

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仪器配有防液部件、自动排气系统、氮气自动排空装置、抗老化抗冲击过滤器、纯度高、压力稳定，完全能满足国内外任何厂家生产的气相色谱仪的要求。它是替代传统气瓶的理想仪器。

氮空发生器采用变压吸附技术（PSA）产生连续的高纯氮气。压缩空气经过冷凝管和过滤器进行初步的干燥和过滤后，进入处于净化模式的CMS柱，除去大部分O2、CO2、水分、碳氢化合物，输出洁净、干燥的高纯氮气。还有一些实验室的规模十分大，他们需要一个发生器供气系统来给整个实验室供气。所以，广大用户在选购氮空发生器时需要注意以下这些事项：
首先、我们首先要选择有资质的厂家，确保产品的质量，还要考察厂家的售后服务是否完善，这样就既保证了仪器的质量又有可靠地售后服务；
第2、我们要根据自己的需求对氮空发生器的型号也就是所需多大流量进行选购，说白了不同型号流量大小也不同，纯度也不一样，一定要对商家说明仪器的具体参数及做什么使用及配套仪器情况，便于厂家为您选择合适的型号；
总之我们在选购氮空发生器时一定要根据自己需求进行购买，要货比三家，对仪器的性能、参数、价格、发货安装、售后维护、整个服务要有充分了解。