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- 敏姐是个好人0 2015-12-14 00:00:00
- 参与复制主要的酶和蛋白质因子介绍如下: (1)DNA聚合酶:①原核细胞:以大肠杆菌为例,已发现DNA聚合酶Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ,都是多功能酶,既有5'→3'聚合酶活性,又有3'→5'外切酶活性,DNA聚合酶Ⅰ还有5'→3'外切酶活性。DNA聚合酶Ⅰ的主要功能是修复DNA的损伤,在复制中还能切除RNA引物并填补留下的空隙。DNA聚合酶Ⅱ的作用是损伤修复。DNA聚合酶Ⅲ是DNA的复制酶。新近研究发现的DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ,它们涉及DNA的错误倾向修复。 ②真核细胞:DNA聚合酶α,β,γ,δ和ε,其中DNA聚合酶α和δ真正具有合成新链的复制作用;β和ε参与DNA的损伤修复,γ负责线粒体DNA的复制。 (2)引物合成酶和引发体:引物合成酶又称引发酶,催化RNA引物的合成,该酶作用时需与另外的蛋白结合形成引发体才具有催化活性。 (3)DNA连接酶:催化双链DNA一条链上切口处相邻5'-磷酸基和3'-羟基生成磷酸二酯键的酶。连接酶作用的过程中,在原核细胞中以NAD+提供能量,在真核细胞中以ATP提供能量。 (4)DNA解螺旋酶:催化:DNA双螺旋解链的酶。 (5)DNA单链结合蛋白(SSB):与DNA分开的单链结合,起稳定DNA的单链、阻止复性和保护单链不被核酸酶降解的作用。 (6)拓扑异构酶Ⅰ:消除DNA的负超螺旋,改变DNA的超螺旋数。 (7)拓扑异构酶Ⅱ:引入负超螺旋,消除复制叉前进带来的扭曲张力。
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DNA复制机制和共转录R环之间发生冲突时,会导致癌细胞基因组不稳定性,进而影响DNA合成。本文中,我们展示了ATP依赖性染色质重构INO80复合体可以促进R环解析,防止癌细胞中的复制相关的DNA损伤。
我们使用STED超高分辨率显微镜进行测量,INO80和R环之间具有前所未有的精密共定位。
标题图像:INO80(蓝色)和R环(黄色)的3D体表面模型
在我们的实验中,相比共聚焦成像(250 nm),STED能达到大约50 nm的分辨率,这使我们能够有较高的确定性区分真假共定位事件。使用STED可以轻松观察到INO80亚基和R环亚基之间的共定位,而通过共聚焦成像观察到的INO80和R环之间的多个共定位事件,经STED观察是分离的不同亚基。
在所有分析的细胞中,我们发现相比非共定位R环,INO80共定位的R环明显更加紧密、体积和长度也更大。这些数据表明,INO80复合物与细胞核中最 大、最浓缩的R环域相关。
图1:STED解析INO80和R环的相对位置。
阅读完整文章:
Prendergast L., McClurg U.L., Hristova R., Berlinguer-Palmini R., Greener S., Veitch K., Hernandez I., Pasero P., Rico D., Higgins J.M.G., Gospodinov A. & Papamichos-Chronakis M.:
Resolution of R-loops by INO80 promotes DNA replication and maintains cancer cell proliferation and viability
Nature Communications volume 11, Article number: 4534 (2020)
https://doi.org/10.1038/s41467-020-18306-x
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