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- 糖糖小白兔520 2016-01-29 00:00:00
- 在气相色谱中:H=A+B/U+CU GX液相色谱与气相色谱相比分子扩散项B可以忽略不计,即:H=A+CU 速率理论重要的贡献是提出了范第姆特方程式。它是在塔板理论的基础上,引入影响板高的动力学因素而导出的。它表明了塔板高度(H)与载气线速(u)以及影响H的三项因素之间的关系,其简化式为 H=A+B/u+Cu 式中A、B、C为常数:A项称为涡流扩散项,B/u项称为分子扩散项,Cu项称为传质项;u为载气线速率,即一定时间里载气在色谱柱中的流动距离,单位为cm/s。由式中关系可见,当u一定时,只有当A、B、C较小时,H才能有较小值,才能获得较高的柱效能;反之,色谱峰扩张,柱效能较低,所以A、B、C为影响峰扩张的三项因素。 气相色谱与液相色谱的其他不同点: 一、流动相不同:HPLC为液体流动相,GC为性气体作流动相(通常叫做载气) 二、进样器不同:GX液相为平头进样针,气相色谱为尖头进样针 三、色谱柱长不同: (1)气相色谱柱通常几米到几十米 (气相色谱由于载气的相对分析量较低,分子间隙大,故粘度低,流动性好,组分在气相中流动速度快,因此可以增加柱长,以提高柱效)。 (2)液相色谱柱通常为几十到几百毫米 四、分析种类有差异: 气相色谱分析的对象多为(不适):分子质量小于1000,低沸点,易挥发,热稳定性好的化合物。 液相色谱:更适用于分析高沸点,难挥发,热稳定性差,分子质量较大(1000 - -2000)的液体化合物。 五:样品柱前变化不同:气相色谱的样品在柱前必须变为气体(气化室汽化),而液相色谱的样品在柱前则无变化。 六、所用检测器有差异: 液相主要为:紫外检测器,荧光检测器、示差折光检测器...
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液相色谱仪除了日常维护保养外,使用高纯度溶剂不仅能保护液相系统,也能增加结果的可靠性。HPLC级表示化学试剂的纯度,是可在GX液相色谱中使用的试剂的纯度,制备色谱法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC级试剂。
样品在注入液相系统前,必须选择一种合适的HPLC溶剂。在反相GX液相色谱中,当样品溶剂与流动相的洗脱强度有差异,尤其是前者的洗脱强度较强时,就会产生峰的变形及柱效的降低。解决该问题最有效的方法是使用流动相作为溶剂溶解样品,这样既可以避免样品溶剂和流动相之间任何强度或粘度的不匹配,也可以减少样品分析时基线的漂移。溶剂在流动相中起着重要的作用,并有助于将进样品通过分离柱后输送到检测器。为了满足不同的分析要求,可以购买不同纯度等级的溶剂来使用,HPLC分析需要使用高纯度的溶剂,但是同时也要考虑成本和实用性等方面。
HPLC级溶剂的纯度通常超过99.9%,并且瓶身标签上还会标明其他杂质的含量。但是杂质会导致多余的峰,从而干扰色谱图中的主峰,对我们的分析结果产生干扰。杂质产生的原因有很多,可能溶剂纯度不够,可能是瓶身不干净或者软管不干净,还可能是溶剂吸滤头的过滤杂质效果不好。恒谱生不锈钢流动相进样口过滤器能安全有效地保护泵和止回阀,尺寸小,适用于各种品牌的HPLC系统和多种小瓶口的存储池容器。吸滤阻力较小,几乎没有背压和形成空化,兼容多种流动相管路,无需换吸滤头即可配不同规格的吸管,过滤微粒污染物效果好,无气泡,溶剂利用率高。
在整个紫外线可见波长范围内,没有溶剂是100%透明的,常用的HPLC溶剂在一定波长范围内显示出透明性。大多数应用中会使用紫外线检测器,因此所选的溶剂应该尽可能具有低的紫外线截止波长,让大多数的样品组分在高于截止值的波长处显示出可测量的吸收度。除此之外,溶剂的粘度越高,填充柱中固定相的阻力将导致背压越高,因此所选溶剂也应具有低粘度才是比较理想的。
大多数的溶剂在密封瓶中才能维持它的稳定性,但某些溶剂的保存期限有限。使用时要注意查看使用期,注意在有效期内使用,不要购买过多的溶剂避免ZH用不完产生了浪费行为。
作为ZH的建议,所有溶剂在使用前通过进样口过滤器过滤并脱气,这样的预防措施将提高HPLC系统的使用寿命,也有助于增加分析结果的可靠性。
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HPLC系统能否有效运行取决于流动相和样品不受化学杂质或固体悬浮液的影响。对于HPLC流动相的处理和使用注意事项讨论主要围绕在流动相的制备和使用中应采取的措施。对于样品过滤的重要性讨论主要围绕在进样时清洁样品的好处。
HPLC色谱柱是HPLC系统中的重要组成部分,使用时需要细心使用,用完后要维护避免下次使用发生问题。经常更换色谱柱是很昂贵的,因此为了节约成本,需要zui大程度地延长色谱柱的使用寿命。同时也要细心维护色谱柱,以便每次获得结果保持准确性和一致性。
由于经常使用色谱柱,化学杂质和固体悬浮液颗粒等会逐渐积累,色谱性能在使用过程中开始下降。流动相或样品中存在的大颗粒杂质开始沉积在色谱柱的入口上,从而干扰流动的均匀性。较小的颗粒会导致背压增加,导致阻塞固定相中的流路。
污染物有哪些?
1、反相分离中高度保留的化合物,例如脂肪酸。
2、不可逆地保留的化合物,如残留的蛋白物质,在样品提取时并未完全去除。解决这个问题可以在HPLC分析之前对样品中的蛋白质进行去蛋白化。
3、颗粒杂质,可能是样品未过滤,系统组件(例如泵或进样器中的密封件)的磨损导致产生颗粒杂质。又或者是进样时溶剂中本身还有颗粒物杂质,没有过滤导致颗粒物质进入系统。建议使用溶剂进样口过滤器,过滤掉微小颗粒物质,避免进入到HPLC系统中。
恒谱生2μ,5μ,10μ,20μm液相色谱仪流动相入口溶剂过滤器,保护泵、单向止回阀 、进样器 、色谱柱免受有害颗粒污染物的损坏;吸滤阻力较小,较大的圆柱形筛板表面积,几乎没有背压;吸滤头尺寸较小,可用于多种小瓶口的存储池容器;不会将空气引入系统,无气泡进入流动相管路,储液瓶溶剂抽取利用率可达99%以上,大大减少瓶底溶剂因无法净真空吸取而造成的浪费;设有多阶管路接头,兼容多种内径溶剂流动相管路,不需要更换吸滤头即可匹配不同规格的吸管;产品兼 容性高,适用于各种品牌的HPLC系统。
4、柱内残留缓冲液,干燥后导致结晶沉淀。使用色谱柱后用HPLC级纯水或缓冲溶液洗涤色谱柱可防止此类盐沉淀的形成。
什么是保护柱?
保护柱是安装在进样器和分析柱之间的,截留导致色谱柱筛板堵塞、柱头塌陷和柱效下降的化学物质和颗粒物。化学物质和颗粒物会污染、堵塞色谱柱,给分析带来不良影响等。这时通过在色谱柱前安装分析保护柱可以防止其产生,能起保护色谱柱的作用。保护柱zui好与分析柱具有相同的填料,以消除分离的复杂性。保护柱的内部ID应与分析柱相当 ,以最小化背压。保护柱需要定期更换,可根据例如背压增加,峰展宽和峰保留时间的变化来决定更换的周期。
恒谱生建议您可以有效地利用、定期更换色谱保护柱,以延长色谱柱的寿命。
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