如何正确使用液相色谱仪

gjkbtrvt99 2016-12-01 22:48:47 504 浏览

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zhuaihua6408 2016-12-02 05:08:29

GX液相色谱仪的使用 1.色谱柱它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管，内径为4～5mm，长100～250mm。按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净，用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中，用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇：水(83：17)为流动相测定柱效及分离度塔板数在2～3万/ml以上及分离度在1.5以上者，柱效好。为防止柱污染，常用1个 50mm长，4~5mm内径，装有硅胶(40-50mm)或立柱相同填料的保护柱(预柱)接在主柱之前，以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经，以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚，再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。 2.流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中，经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱，Z后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法(isocratic dlution)，即自洗脱开始到结束，溶剂的配比恒定。另一类为梯度洗脱法(gradicnt clution)，即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比，从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离，而整个色谱过程缩短。必须注意，梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相GX液相色谱法中。 3.检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收，荧光发射和电化学三种。紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物，大多数药物分子对紫外光有吸收，故能较普遍采用，检测限有0.1μg左右。紫外检测器有固定波长型、可变波长型及扫描器，既能使流动相停流作组分的定性定量检测，又能提高测定灵敏度，重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。80年代应用激光替代氙灯光源，光强度增加了3~4倍，对某些药物的检测限可达pg级。电化学检测器是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池，在一暄电压下电解产生电流，放大后检测，检测限pg级。 4.数据处理现代GX液相色谱仪带有数据处理系统，除记录谱外，还能自动记录峰的保留时间，能自动积分求算峰面积，并能按照预定的程序作有关计算，报告分析结果。 GX液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法 1 液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(如图1所示)。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件，同时也是容易出事故的主要场所。 2 常见问题及解决方法 2.1 针对柱压问题(表1) 柱压问题是使用GX液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在50PSI之间。压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题，但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动相种类相联系。值得注意的是在使用梯度洗脱时，进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。在实际应用中柱压过高可从以下几个方面来考虑[1]。首先考虑柱子是否被堵，此时可更换一根新柱子进行检测。 2.2 针对保留时间漂移的问题 [2，3] (表2) 保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题，其包括了保留时间增大和减小。它的产生与很多原因有关。 2.3 针对异常色谱峰问题[2-4] 异常的色谱峰指的是色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。具体情况与原因分析如表3。 3 GX液相色谱仪的保养[5-7] 3.1 HPLC的日常操作条件工作温度10～30℃; 相对湿度<80%; Z好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 3.2 泵的保养使用流动相尽量要清洁;进液处的沙芯过滤头要经常清洗;流动相交换时要防止沉淀;避免泵内堵塞或有气泡。 3.3 进样器的保养每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染。 3.4 柱的保养柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;当柱子和色谱仪连接时，阀件或管路一定要清洗干净;要注意流动相的脱气; 避免使用高粘度的溶剂作为流动相;进样样品要提纯;严格控制进样量;每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品;每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱;若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。 3.5 检测器(UV)的保养紫外灯的保养要在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器;在分析完成后，马上关闭检测器。同时样品池要保养。 4 结语在GX液相色谱使用过程中故障排出时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，从而确定假定因素与问题之间的联系;如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，从而避免浪费;养成良好的记录习惯，一个良好的记录是成功地进行故障排除的关键。总之，在使用GX液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养，仪器系统的干净是用好仪器和维护维修仪器的关键。建议您可以到行业内专业的网站进行交流学习！

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液相色谱仪关闭步骤如何算正确？

液相色谱仪关闭步骤：确保仪器安全高效使用

液相色谱仪（HPLC）是分析化学、制药、食品检测等领域常用的重要分析仪器。在使用过程中，液相色谱仪的正确关闭步骤至关重要，不仅可以延长设备的使用寿命，还能确保仪器下次启动时的稳定性和准确性。本文将详细介绍液相色谱仪的关闭步骤，从清洗到关闭电源，每个环节都需要精确操作，以确保设备的佳状态和安全性。

一、完成样品分析后，停止运行

在关闭液相色谱仪之前，首先要确保所有的样品分析任务已经完成。如果液相色谱仪正在进行实验，先停止运行，确保分析过程中没有遗漏或半途而废的步骤。这是非常重要的，避免操作中途强制关闭设备，可能会导致系统损坏或分析数据丢失。

二、切换到合适的溶剂系统

关闭液相色谱仪时，首先要确保泵的流动相已经切换到适合的溶剂系统，避免由于溶剂的不当使用或长时间停留在泵管路中，造成溶剂和管路之间的反应或堵塞。通常，使用去离子水或洗脱液对仪器进行彻底清洗是非常重要的步骤，这样能够减少污染，防止对下次实验的影响。

三、清洁和冲洗柱头及管路

液相色谱柱在运行过程中容易沉积样品残留物，因此在关闭仪器之前，需要进行清洗。通过泵送清洗溶剂进行冲洗，确保所有的样品成分都已完全清除。如果在使用过程中使用了强酸或强碱溶剂，特别需要进行充分的清洗，以防止其残留对柱头或泵系统的腐蚀。

四、关闭仪器的主要电源和气源

在完成清洗后，关闭液相色谱仪的主要电源及气源。对于大部分液相色谱仪，电源控制开关位于主机的侧面或后面。关闭气源尤其是气压控制系统，以避免系统内气压过高，造成不必要的损害。注意关闭仪器上与气源、液体、流量控制等相关的辅助设备。

五、检查仪器状态并记录

在关闭仪器之前，应当检查仪器的工作状态。观察液相色谱仪的各种显示面板，确认所有指示灯、报警系统是否正常。如果设备有记录仪表或者数据保存功能，确保所有的实验数据已经保存或者备份。这一检查有助于为后续操作提供准确记录，防止数据丢失或设备故障。

六、定期维护和检查

即使完成了关闭步骤，为确保液相色谱仪的长期稳定运行，定期的维护和检查也不可忽视。可以参考厂家手册或操作指南，定期对设备进行必要的维护工作，如清洁滤芯、检查柱头、更换密封圈等。良好的日常保养将有效避免设备故障和分析误差，提升仪器的使用寿命。

总结

液相色谱仪的关闭不仅是结束一次实验的简单步骤，更是保证仪器性能的关键环节。只有按照正确的顺序进行关闭，避免操作疏漏，才能确保液相色谱仪的稳定性和准确性。每一步的细致操作都是为了仪器的安全使用和下次实验的顺利进行。对于专业人员来说，掌握液相色谱仪的关闭步骤是维护设备、保证数据质量的重要基础。

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制备液相色谱仪如何使用

本文围绕如何规范地制备并使用液相色谱仪展开，聚焦前处理、系统配置、方法建立、日常运行与维护等关键环节，旨在实现稳定分离和结果的重复性。通过系统化的操作步骤和要点，把实验室日常的分析流程标准化，提升数据的可靠性与分析效率。

首先是设备与安全的准备工作。确保液相色谱仪放置在通风良好、防震且接地可靠的位置，检查电源、排溢与废液收集系统完好。启动前记录仪器序列号、软件版本与泵、检测器、进样阀的状态。清点耗材，如苯乙烯树脂管路、滤器、针头、进样瓶等，确保无污染源进入系统。若有防护要求，应穿戴防护用品，遵循实验室安全规范。

其次是溶剂系统与柱前准备。制备高纯度流动相，依次进行滤器过滤和超声除气，确保气泡小化。对梯度洗脱方法尤为关键，需设置起始体积比、等度时间、梯度升降速率及体积。为避免离子对柱的影响，若使用离子对柱，需选用相容的缓冲溶液并保持pH稳定。柱前冲洗和系统平衡是必要步骤，通常在分析前以工作流动相预冲洗一定时间直至基线稳定。

再谈系统组装及排气流程。安装柱、柱尾及检测器前后，按制造商建议进行系统排气，排除微量气泡。确保进样路径清洁，针头与样品瓶口无污染。初次运行时，用标准溶液进行空白、标准曲线和系统适用性测试，记录基线噪声、峰形与保留时间的稳定性。对多组分分析，注意对各组分的分离是否在预计的理论分离区。

方法设定与运行要点也很关键。根据分析目标选择分离模式（反相、正相或离子排斥等），设定合适的流速、柱温与检测波长。选择合适的柱子与粒径，设定注射体积、进样速率与检测灵敏度。初始方法以简单的梯度或等度洗脱为起点，逐步细化峰形、分离度与基线稳定性，避免过度优化导致方法过度特异化而难以转移。运行过程中记录峰面积、保留时间和质控样品结果，确保方法的可重复性。

质量控制与方法验证不可或缺。应按实验室的SOP进行线性范围、精密度、回收率、检测下限与上限等验证。建立并维护方法的适用性矩阵，结合日常质控样品，监控系统漂移与溶剂批次差异。记录所有参数、版本与修改历史，确保方法可追溯。遵循相关法规与行业指南，确保数据完整性与可审计性。

维护与故障排除也需常态化。日常维护包括清洁泵头、密封件、排气管路及检测器进样系统，定期更换溶剂过滤器与密封垫。留意基线波动、峰形异常、背压异常与空白样品的污染迹象，结合溯源分析，快速定位源头。遇到喷射器堵塞、梯度迟滞或温控不稳定，按厂商建议执行维护或更换组件，并记录处理过程与效果。

制备液相色谱仪并进行规范化使用，是获得稳定、可追溯分析结果的基础。通过系统化的前处理、严谨的溶剂与柱前准备、科学的参数设定以及持续的质量控制与维护，可以显著提升分离质量与方法的重复性，为实验室的分析工作提供可靠的技术支撑。

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