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- 沙漠之鹄 2009-04-09 00:00:00
- RNA的复制 以DNA为模板合成RNA是生物界RNA合成的主要方式,但有些生物像某些病毒,噬菌体它们的遗传信息贮存在RNA分子中,当它们进入宿细胞后,靠复制而传代,它们在RNA指导的RNA聚合酶催化下合成RNA分子,当以RNA模板时,在RNA复制酶作用下,按5'→3'方向合成互补的RNA分子,但RNA复制酶中缺乏校正功能,因此RNA复制时错误率很高,这与反转录酶的特点相似.RNA复制酶只对病毒本身的RNA起作用,而不会作用于宿主细胞中的RNA分子。 小 结 转录是以DNA为模板合成RNA的过程,经过转录DNA分子中的贮存信息传递到RNA分子中,再由mRNA做为模板合成蛋白质分子,转录也是从DNA的一个特定位置开始的,以DNA分子中的一条链为模板,在RNA聚合酶作用下,以四种单核苷酸为原料,合成方向仍是5'→3',完成RNA的合成. 大肠杆菌的RNA聚合酶由五个亚基构成,α2ββ'构成核心酶,再加上σ因子是全酶。RNA聚合酶识别并特异结合的DNA一段区域叫做启动子,启动子的序列中一10区和一35区很保守,决定了启动子的强度是转录正确起点的关键,真核生物中位于--20的TATA盒和--70--110区域的元件是控制真核生物RNA的转录的关键。真核生物的RNA聚合酶有Ⅰ、Ⅱ、ⅢTMtn几种,它们分别催化rRNA、mRNAt、tRNA Usn RNA、tRNA、以及线粒体RNA的合成。转录作用停止于DNA模板的终止信号,蛋白质ρ因子可识别此信号,终止区常常转录出一段反向重复序列。 转录生成的RNA分子为前体RNA,必须经过必在的加工修饰,才能成为有功能的RNA分子,但真核生物的RNA转录后加工修饰比原生物复杂的多。原核生物转录生成的mRNA属于多顺反子形式,由于原核生物没有核膜,转录与翻译的过程没有明显的屏障。而真核生物转录生成的mRNA为单顺反子,而且具有复杂的转录加工修饰,包括5’端加幅,3’端加尾,剪切内含子,连接外显子等等,人们在研究rRNA前体的加工过程中发现了具有催化作用的RNA分子,称为酶RNA,从而打破了酶的本质是蛋白质的传统观念。
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横跨复制细胞器双层薄膜的分子孔
在过去的20年里,发生过3次对人类有潜在致命危险的冠状病毒大爆发,其中包括引发新冠肺炎(COVID-19)的SARS-CoV-2病毒。冠状病毒基因组复制与病毒诱导的细胞溶质双膜小泡有关,为病毒RNA在感染细胞内的合成提供了一个可定制的微环境。但目前尚未知晓与细胞溶质相比,这些新合成的基因组和mRNA如何从密封复制间室移动到细胞溶质,以确保其子代病毒的转化及合成。
本次研究中使用了细胞低温电子显微镜,来可视化观察横跨细胞溶质双膜小泡并且可将RNA输出到细胞溶质当中的分子孔复合体。研究发现,大型病毒跨膜蛋白的六聚复合体可形成冠状复合体的核心。该结构很有可能在细胞复制当中发挥关键作用并构成潜在的药物靶点。研究中使用到的被SARS-CoV-2病毒感染过的VeroE6细胞制备用于电子低温断层扫描成像,期间搭配使用了徕卡显微系统的投入冷冻仪。敬请参阅发表论文了解更多详情。
阅读全文横跨冠状病毒复制细胞器双层薄膜的分子孔
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Science (2020) eabd3629, DOI: 10.1126/science.abd3629
了解更多:https://www.leica-microsystems.com.cn/cn/?nlc=20201230-SFDC-011237
- 癌细胞中的DNA复制
DNA复制机制和共转录R环之间发生冲突时,会导致癌细胞基因组不稳定性,进而影响DNA合成。本文中,我们展示了ATP依赖性染色质重构INO80复合体可以促进R环解析,防止癌细胞中的复制相关的DNA损伤。
我们使用STED超高分辨率显微镜进行测量,INO80和R环之间具有前所未有的精密共定位。
标题图像:INO80(蓝色)和R环(黄色)的3D体表面模型
在我们的实验中,相比共聚焦成像(250 nm),STED能达到大约50 nm的分辨率,这使我们能够有较高的确定性区分真假共定位事件。使用STED可以轻松观察到INO80亚基和R环亚基之间的共定位,而通过共聚焦成像观察到的INO80和R环之间的多个共定位事件,经STED观察是分离的不同亚基。
在所有分析的细胞中,我们发现相比非共定位R环,INO80共定位的R环明显更加紧密、体积和长度也更大。这些数据表明,INO80复合物与细胞核中最 大、最浓缩的R环域相关。
图1:STED解析INO80和R环的相对位置。
阅读完整文章:
Prendergast L., McClurg U.L., Hristova R., Berlinguer-Palmini R., Greener S., Veitch K., Hernandez I., Pasero P., Rico D., Higgins J.M.G., Gospodinov A. & Papamichos-Chronakis M.:
Resolution of R-loops by INO80 promotes DNA replication and maintains cancer cell proliferation and viability
Nature Communications volume 11, Article number: 4534 (2020)
https://doi.org/10.1038/s41467-020-18306-x
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