提取血液的RNA怎么提取

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  sunmoon9927 2017-03-06 00:00:00

  取新鲜的血液（紫管），加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10，000 rpm离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml TRIzol。室温放置5min，使样品充分裂解。4℃12，000 rpm 离心10分钟，取上清（）。每1ml TRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min，自然分相。4℃ 12，000rpm离心10-15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中（小心吸取水相）在上清中加入等体积冰冷的异丙醇（），室温放置10-20min。4℃ 12，000 rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。RNA沉淀中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配制，），温和振荡离心管，悬浮沉淀。4℃5，000-8，000 rpm离心1-2min，弃上清。室温放置1-2分钟晾干沉淀。 沉淀中加入50-100μl RNase-free水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。检测纯度和浓度（OD260/OD280在2.0左右）

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