BCA蛋白检测方法的原理是什么?

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  小小玲玲玲玲9 2017-10-15 04:11:57

  原理简介 BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。 产品特点 1．步骤简单，45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。 2．灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，Z小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。 3．BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20， 60， 80。 4．在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。 5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。 BCA蛋白质定量检测试剂 在蛋白质的表达纯化，结构和功能的研究工作中，蛋白质的定量随处可见。但是，什么是理想的蛋白质定量方法？如何准确、快速的对蛋白质进行定量，对于不同的样本，如何选取相应的蛋白质定量试剂和方案？如何避免实验中引入的其它物质对蛋白质定量的干扰，PIERCE为这一切提供了可以信赖的解决方案。 PIERCE的BCA(bicinchoninic acid)蛋白质检测试剂是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数甚小而深受专业人士的青睐。其中MicroBCA产品可检测到0.5μg/ml的微量蛋白，是目前已知的Z灵敏的蛋白质检测试剂之一。 主要特点： · 准确灵敏：BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000μg/ml，采用加强方法可检测到 5μg/ml；MicroBCA试剂测定范围是0.5-20μg/ml。 · 快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。 · 经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。 · 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。 · 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考玛斯亮蓝。 基本原理： 碱性条件下，蛋白将Cu++还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 BCA分子式： 原理图： 用PIERCE的BCA试剂盒所得的标准曲线： MicroBCA蛋白标准曲线 BCA蛋白标准曲线 BCA蛋白质检测流程： 图片点击： http://www.perbio.com.cn/PIERCE/Protein%20Chemistry/bca.htm

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