课程回放 | 电镜和能谱分析应用中的部分问题解析

土壤半挥发性有机物检测整体解决方案

超级微波技术综述及其在元素分析中的应用

湿法消解综述

上周，赛默飞电镜网络讲堂系列圆满落幕，感谢众多老铁们的观看及提问。赛默飞电镜演示微直播仍在火热进行，未来我们还会推出更多系列的网络讲堂，请您持续关注！

“TEMGX高质量扫描透射成像”直播答疑汇总

Q：Smart Tilt这个功能大概是哪年开始有的？转角度有什么要求？

Smart Tilt是2016年推出的。装机工程师做简单的校准后，用户只需要使用配套的双倾样品杆，按演示的操作即可，非常简便。

Q：TEM mode下不断改放大倍数会把CCD烧了吗？

这次演示的TEM操作是在Talos配备的荧光屏相机上进行的，具有高动态范围，对于透射图像、衍射花样和菊池线都可以直接观察。

Q：这次演示的Velox是什么版本？框选放大功能是哪个版本有的？

这次用的是Z新的Velox 2.11。2.10版本加入了框选放大等功能。Velox还在持续保持更新，只要用户的TEM Server版本支持即可自行免费升级。

Q：没有球差还能看到原子像？这么厉害？

Talos F200X的STEM分辨率验收指标为0.16nm，实际使用时分辨率会优于此数值，Talos上也可以拍出硅[110]带轴的哑铃结构（硅哑铃原子间距0.14nm）。

Q：为什么用钛酸锶，是容易看吗？

在钛酸锶[100]带轴上是可以看到原子像的，钛和锶两种原子在HAADF上有比较好的衬度差异，同时也可以通过Z新iDPC技术获取HAADF下没办法实现的氧原子位置的表征，能够直观地给大家展示Talos的性能。

Q：做STEM都不用调Ronchigram了吗？

Talos上调Ronchigram不是必须的，系统稳定性很好，可以直接调用STEM光路文件。日常使用也可以用我们演示的AutoSTEM功能自动调整象散。只有在状态比较差的情况下才需要检查Ronchigram。

　　牛血清实验中常见的问题解析!

　　胎牛血清通常在细胞培养中作为基础生长培养基的添加剂，在细胞培养中，血清供应了丰富的高分子蛋白，低分子量营养物，疏水载体蛋白和其他体外细胞生长必要的成分如激素和粘附因子。同时，胎牛血清可以增加培养基的缓冲能力或中和有毒成分，起到保护细胞的作用。在细胞培养过程中是否选择添加血清，主要根据基础培养基化学成分，培养细胞的类型和培养体系而定。今天天津本生小编给大家分享的是牛血清实验中常见的问题解析!搬起小板凳快来围观吧!

　　血清实验中常见的问题解析：

　　一、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

　　将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

　　长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

　　建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

　　二、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?

　　沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

　　三、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?

　　一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

　　四、 为什么要热灭活血清?

　　加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

　　五、 有必要做热灭活吗?

　　实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

　　而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显着的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。

　　非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

　　六、细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理?

　　一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

　　七、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?

　　来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

　　组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

　　血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。

　　解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

　　牛血清实验中常见的问题解析!我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

白酒中酯的含量对白酒的质量有决定性作用，不同等级的白酒有不同的酸酯要求，只要是按正常酿造工艺生产的白酒，甲醇等物质的含量是不应超过限量标准。有关白酒检测，以下问题，您是否了解？认真读完下面 Q & A ，码上注册，可获“终 极应用宝典”！

Q1如何在甲醇检测中避免聚焦变形的问题？

是小分子量的时候，需要采用气相色谱、小分流比安股金后研磨柱。

Q2如何处理乙酸、乙酯的分离？

低温 35 度保持 4 分钟，要考虑通用性，结合不同气候和天气条件下的室内温度，还要考虑白酒中大比例的水，能达到 1.5 的分离度就很好。

Q3不同温度下，白酒检测如何优化分离度？

温度很关键，把温度降到 40 度，对分离度有帮助。

Q4气化好坏对重复性的影响如何解决？

大分流比的情况下要有足够的温度和充足的玻璃膜。

Q5空气压力波动会对基线产生影响，怎么办？

高压钢瓶的输出压力比较稳定，可以考虑采用高压钢瓶。

Q6 白酒检测平均多久出样？

平均 55 分钟左右一个样。

想要了解更多白酒检测关键操作的最 优操作吗？扫描下方二维码，观看安捷伦气相色谱产品线资 深技术工程师那顺老师针对白酒分析关键问题的讲解和实验结果解析。

周三，赛默飞首次电镜演示微直播之TEMGX高质量扫描透射成像圆满落幕，感谢众多老铁们的观看及提问，赛默飞电镜演示微直播还在火热进行，请您持续关注！

直播答疑汇总

Q：Smart Tilt这个功能大概是哪年开始有的？转角度有什么要求？

Smart Tilt是2016年推出的。装机工程师做简单的校准后，用户只需要使用配套的双倾样品杆，按演示的操作即可，非常简便。

Q：TEM mode下不断改放大倍数会把CCD烧了吗？

这次演示的TEM操作是在Talos配备的荧光屏相机上进行的，具有高动态范围，对于透射图像、衍射花样和菊池线都可以直接观察。

Q：这次演示的Velox是什么版本？框选放大功能是哪个版本有的？

这次用的是Z新的Velox 2.11。2.10版本加入了框选放大等功能。Velox还在持续保持更新，只要用户的TEM Server版本支持即可自行免费升级。

Q：没有球差还能看到原子像？这么厉害？

Talos F200X的STEM分辨率验收指标为0.16nm，实际使用时分辨率会优于此数值，Talos上也可以拍出硅[110]带轴的哑铃结构（硅哑铃原子间距0.14nm）。

Q：为什么用钛酸锶，是容易看吗？

在钛酸锶[100]带轴上是可以看到原子像的，钛和锶两种原子在HAADF上有比较好的衬度差异，同时也可以通过Z新iDPC技术获取HAADF下没办法实现的氧原子位置的表征，能够直观地给大家展示Talos的性能。

Q：做STEM都不用调Ronchigram了吗？

Talos上调Ronchigram不是必须的，系统稳定性很好，可以直接调用STEM光路文件。日常使用也可以用我们演示的AutoSTEM功能自动调整象散。只有在状态比较差的情况下才需要检查Ronchigram。

私信主编的老铁们请注意  

错过直播不用愁

直播视频回放，可扫码观看

昨天，“TEM快速准确的成分分析”微直播受到了众多老铁们的追捧及提问。明天周五，还有一场“FIB之GX新一代双束电镜” 微直播等待大家；四月我们还会推出更多系列的网络讲堂，请您持续关注！

“TEM快速准确的成分分析”直播答疑汇总

Q：Velox可以进行能谱基线校准吗？

在电镜的安装调试阶段，会由安装工程师使用专用软件对谱线峰位进行校准。

Q：扣背底的参数可以自己调整吗？

在Velox自动完成扣背底之后，可以在Integrated Spectra上进行手动调整，包括背底模型、背底窗口等参数。

Q：没有Fe等杂峰信号是Talos的特殊设计么？之前的TF20就很高。

Tecnai系列使用侧插能谱，受制于能谱安装方向和样品倾转角，会有较多的镜筒干扰信号。Super-X距离样品较近，且探头直接朝向样品，很少会采集到来自于镜筒和极靴的X射线信号，显著降低了干扰信号的接收，能够获得目前市面上Z干净的能谱。电镜镜筒内实测的峰背比至少超过4000。

Q：请问哪里有关于四种STEM探头特性的介绍？四个探头同时使用与单个探头使用相比，图像采集时间是否增加？

Talos 采用的四个STEM成像探头同轴安装于相机上方，能够通过Velox软件同时采集并实现漂移校正（DCFI）功能。不同的探头接收不同收集角的信号，从而获得环形暗场（ADF）、环形明场（ABF）以及明场（BF）图像的采集。此外，调整相机长度可以改变探头的接受角范围，实现不同类型图像信息的采集，例如用同一个探头可以分别获取ABF和ADF图像。四个探头具备独立的信号通道，数据可以同时采集处理，与单个探头使用相同参数设置相比，图像采集时间没有显著差别。

Q：Velox的能谱数据如何导出原始数据，比如每个像素的计数，以便后期用其他软件读取处理？

Velox处理好的数据可以直接输出tif、mrc等图像文件和csv等数据文件。Velox的能谱原始数据使用了HyperSpy数据流格式保存，可以用相应的软件查看。

Q：样品测量前已经知道样品中包含的元素吗？还是通过相互作用判断出是什么元素？

此次直播演示的样品，预先有初步的元素信息。当然也可以利用电镜中的能谱，通过电子与样品核外电子相互作用产生对应于元素的特征能量X射线，来判断元素种类。由于TEM是一种在极小尺度上进行采样表征的工具，微纳尺度元素分布情况和宏观有时会有出入，因此在TEM测试前如对样品中包含元素情况有基本的了解，会更容易进行元素分析。

Q：样品厚度怎么测量？

样品厚度的测量在TEM中有两种常用的方法，一种是通过电子能量损失谱（EELS），另一种是利用汇聚束电子衍射（CBED）花样进行分析。

Q：如果样品倾转了这个吸收矫正还可以用么？四个能谱探头一起定量？

样品倾转后的吸收校正在Talos电镜中可以实现。Velox软件中的吸收校正模型综合考虑了样品倾转情形下样品杆和探头的几何分布，能够处理遮挡、吸收等因素造成的四个探头收集信号不一致等影响，提高定量准确度。这是其他电镜的能谱探头及软件所不能够实现的。

Q：这个定量计算对样品有什么要求吗？

严格的EDS谱定量计算需要考虑样品厚度、密度等多种因素。Velox软件可对多种定量相关参数进行设置，以便获得更加准确的定量结果。

Q：前处理和后处理有区别吗？

前处理Pre-filter基于每个像素的能谱原始数据进行处理，能够获得更加准确可靠的定量结果，计算量较大，需要对分析相关知识和样品情况有一定的了解；后处理Post-filter是对软件获得的面扫结果进行图像处理，简单易用，消耗计算资源很少。

Q：采集一组EDS Tomography数据需要多少时间？

具体的采集时间与实验条件和需求有很大关系， 可以根据需求设置单张EDS Mapping的采集时间，并根据角度范围进行估算。

Q：B扫不出来怎么解决？

B由于是较轻元素，相对重元素来说信号产生量低很多，较低含量情况中在EDS采集中比较难以获得。在Velox软件中，可以通过Super-X采集模式的设置，使用High Resolution模式进行优化。

Q：做EDX时，如果要提高FEG的电流，Talos上如何操作？极限电流可以到多少？探头的dead time 会饱和吗？

Talos 200X配备了特有的X-FEG高亮场发射枪，在保证束斑尺寸和分辨率相同的前提下能够获得更高的束斑电流。在操作上，减小Gun Lens、减小Spot Size，使用更大的聚光镜光阑都可以获得更高的束流。极限束流能达到几十nA。Super-X具有极高的速度，Z高通量超过800 kcps，在正常使用中基本不会出现饱和情况。

错过直播不用愁

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