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- 月影缭绕 2016-05-16 03:45:08
- 生物特异分子识别包含2方面的含义,一是DNA即基因方面的识别,而是蛋白质方面的识别。在医学检验方面的应用主要有: 1. 分子生物传感器在医学检验中的应用 分子生物传感器是利用一定的生物或化学的固定技术,将生物识别元件(酶、抗体、抗原、蛋白、核酸、受体、细胞、微生物、动植物组织等)固定在换能器上,当待测物与生物识别元件发生特异性反应后,通过换能器将所产生的反应结果转变为可以输出、检测的电信号和光信号等,以此对待测物质进行定性和定量分析,从而达到检测分析的目的。 分子生物传感器可以广泛地应用于对体液中的微量蛋白、小分子有机物、核酸等多种物质的检测。在现代医学检验中,这些项目是临床诊断和病情分析的重要依据。能够在体内实时监控的生物传感器对于手术中和重症监护的病人很有帮助。 Skladal等用经过寡核苷酸探针修饰的压电传感器检测血清中的丙型肝炎病毒(HCV)并实时监测其DNA的结构转录和聚合酶链式反应(PCR)扩增过程,完成整个监测过程仅需10 min且装置可重复使用。 Petricoin等用压电传感器研究了破骨细胞生成YZ因子(OPG)和几种相应抗体的相互作用,研发出可快速检验血清中OPG的压电免疫传感器。 Dro-sten等报道了检测神经递质的酶电报,将电极放置在神经肌肉接点附近可实时测定并记录邻近的神经元去极化后所释放的递质谷氨酸。 2.分子生物芯片技术在医学检验中的应用 随着分子生物学的发展及人们对疾病过程的认识加深,传统的医学检验技术已不能完全适应微量、快速、准确、全面的要求。 所谓的生物芯片是指将大量探针分子固定于支持物上(通常支持物上的一个点代表一种分子探针),并与标记的样品杂交或反应,通过自动化仪器检测杂交或反应信号的强度而判断样品中靶分子的数量。 在检测病原菌方面,由于大部分细菌、病毒的基因组测序已完成,将许多代表每种微生物的特殊基因制成1张芯片。通过反转录可检测标本中的有无病原体基因的表达及表达的情况,以判断病人感染病原及感染的进程、宿主的反应。由于P53抑癌基因在多数肿瘤中均发生突变,因此其是重要的肿瘤诊断靶基因。 Nam等人将硅基质上合成的寡核苷酸芯片用于血清样品中的丙型肝炎病毒分型。 2.分子生物纳米技术在医学检验中的应用生物活性物质的检测有很多种方法,其中,以抗体为基础的技术尤其重要。免疫分析加上磁性修饰已成功地用于各种生物活性物质和异生质(如药物、致癌物等)的检测。将特异性抗体或抗原固定到纳米磁球表面,并以酶、放射性同位素、荧光染料或化学发光物质为基础所产生的检测与传统微量滴定板技术相比具有简单、快速和灵敏的特点。 Van Helden等将抗体连接的纳米磁性微球与GX率、快速的化学发光免疫测定技术相结合的自动检测系统,则成功地用于血清中人免疫缺陷病毒1型和2型(HIV-1和HIV-2)抗体的检测。另外,用于人胰岛素检测的全自动夹心法免疫测定技术也已建立,其中亦用到抗体、蛋白纳米磁性微粒复合物和碱性磷酸酶标记二抗。 4.分子蛋白组学在医学检验中的应用 当前有关分子蛋白质组学的大量研究成果喜人,但一大部分结论是众说纷纭、甚至是互相矛盾。一些经典的肿瘤标志物却无法在当前以表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术为代表的蛋白质组学技术中体现出来。可能存在以下几方面的问题。一方面是SELDI-TOF-MS技术自身的限制性,包括敏感性、重复性以及使用当前设备对每个峰值蛋白确认的局限性;另一方面是实验设计及对照组选择是否恰当,某个蛋白组模式反映的是肿瘤的特异性,还是炎症反应,或是代谢紊乱等无法定论;另一方面是不同实验室结果可比性、标本处理过程的差异无法探究。只有这些问题得到解决, SELDI-TOF-MS技术在检验医学中才能发挥革命性作用。 5.分子生物学技术在医学检验发展中的趋势 检验医学中的分子生物学技术发展趋势有二:一是定量PCR;二是PCR的全自动化,如应用扩增与检测于一体的一次性试验卡,可较好地解决PCR污染问题。除PCR以外的体外基因扩增技术如连接酶反应(LCR),链置换扩增系统(SDA),转录扩增系统(TAS),自限序列扩增系统(3SR),QB复制酶扩增系统等技术也将由科研进入临床。分子生物学技术的标准化和质量控制引起了广泛关注,特别是卫生部颁发的PCR实验室管理办法对PCR技术应用的健康发展起到了关键作用。为解决PCR交叉污染问题,从标本制备到检测的全封闭系统及相应的自动化仪器已在国内逐步普及。
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- 冻干机在生物领域应用有何优势?
随着冻干机的发展,其可被应用的领域也越来越多,尤其在生物领域,冻干机是用来干燥热敏性物质和需要保持生物活性的物质的一种有效新型干燥设备。现在国内许多制药企业都用冷冻干燥法加工药物,如各种抗生素、生物提取物、疫苗、酶制品等,以及在美容领域广泛应用,如化妆品冻干粉,冻干面膜等。
冻干机在生物领域应用优势,可Z大程度上防止了生物制品、药品在水和热的作用下很容易产生的性变和分解,对生物组织和细胞体损伤较少,能减少活菌体及病毒的死亡。低温干燥,物质中挥发性成分损失很小,微生物的生长和酶的作用无法进行,能保持原来性状。由于干燥在真空下进行,氧气较少,因此易氧化的物质的到了保护。干燥能排除95%~99%以上水分、使干燥后产品能长期保存而不致变质。例如,人血浆在液体状态只保存几个月,而冻干后可保存5~10年。例如:麻疹弱毒活疫苗在液态的有效期为三个月,冻干后可延长一年。真空冷冻干燥的缺点是投资大、维护费用高、因而产品成本高。
冻干机在生物制品方面的具体应用:
a.活菌菌苗。例如卡介苗、流脑菌苗、结核菌苗、口服痢疾活菌苗、沙门氏菌、链球菌等。
b.火毒疫苗。例如麻疹疫苗、流感疫苗、狂犬疫苗、鸡瘟疫苗等。
c.其它生物制品、生化药品。乙肝表面抗原诊断雪球、人白细胞干扰素、辅酶A(CoA)、三磷酸腺苷(ATP)、尿激酶等。
(来源:青岛永合创信电子科技有限公司)
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PCR(polymerase chain reaction,PCR)即聚合酶链反应,是利用一段DNA为模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下,将该段DNA扩增至足够数量,以便进行结构和功能分析。PCR应用场景广泛,不仅在基础研究方面,还包括医学诊断、法医学和农业科学等各大领域。
近期多篇医学研究多篇文献中均应用到PCR技术及PCR仪产品,小编为大家做一下简要分享。
近期南方医科大学临床医学博士生导师、主任医师王雅棣课题组在医学期刊《Oncology Research and Treatment》上发表题为Preliminary Clinical Validation of a Filtration-Based CTC Assay for Tumor Burden and HER2 Status Monitoring in Metastatic Breast Cancer的文章,探索研究基于过滤的CTC测定转移性乳腺癌肿瘤负荷和HER2状态监测的初步临床验证情况。
背景介绍:
循环肿瘤细胞(CTC,CirculatingTumorCell)是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称,因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶(原发灶、转移灶)脱落,大部分CTC在进入外周血后发生凋亡或被吞噬,少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶,增加恶性肿瘤患者死亡风险。CTC检测通过捕捉检测外周血中痕量存在的CTC,监测CTC类型和数量变化的趋势,以便实时监测肿瘤动态、评估治疗效果,实现实时个体治疗。循环肿瘤细胞 (CTC) 承载着从基因组改变到蛋白质组构成的多维肿瘤相关信息,是一种很有前途的液体活检材料。 CTC 的临床有效性在转移性乳腺癌 (MBC) 中得到了最广泛的研究。 CELLSEARCH®检测是目前使用最广泛的方法,研究者们同时也在寻求替代策略。一种基于过滤的微流体装置已被用于富集 CTC,但其临床相关性仍然未知。
方法:在这项初步研究中,作者研究团队招募了 47 名 MBC 患者,并评估了上述 CTC 检测在肿瘤负荷监测和人表皮生长因子受体 2 (HER2) 状态测定方面的性能。结果:在基线时,51.1% 的患者 (24/47) 为 CTC 阳性。在伴随着较差的放射学反应评估的样本中,CTC 计数和阳性率也显著升高。连续抽血表明,与血清标志物癌胚抗原和癌抗原 15-3 相比,CTC 计数能够更准确地监测肿瘤负荷。此外,与之前的报告相比,CTC-HER2 状态与肿瘤-HER2 状态中度一致。选定样本中的 HER2 拷贝数测量进一步支持了 CTC-HER2 状态评估。
结论:这项研究的初步结果表明,CDC 检测在几个方面都有希望,包括敏感的 CTC 检测、准确的疾病状态反映和 HER2 状态确定。目前需要更多的研究来验证这些发现,并进一步表征CTC测定的价值。
在实验验证中,柏恒科技RePure-A 梯度PCR仪发挥了一定作用,助力作者实验研究进行。
而在另一篇发表在《Frontiers in Molecular Biosciences》期刊上的论文,柏恒科技PCR仪也发挥了不小作用。哈尔滨医科大学附属二院肾内科主任医师、博士生及硕士生导师李冰课题组发表的题为Bioinformatic Analysis Combined With Experimental Validation Reveals Novel Hub Genes and Pathways Associated With Focal Segmental Glomerulosclerosis的文章,作者研究团队利用生物信息学分析与实验验证相结合,揭示了与局灶性节段性肾小球硬化相关的新型Hub基因和通路。
背景介绍:局灶节段性肾小球硬化症 (focal segmental glomerulosclerosis, FSGS)是一种临床病理综合征,临床表现为大量蛋白尿或肾病综合征,病理以局灶节段分布的肾小球硬化病变及足细胞变性所致足突融合或消失为特征,多数表现为激素治疗抵抗,并进行性发展至终末期肾病 (ESRD)。本研究旨在探索与FSGS相关的枢纽基因和通路,以确定潜在的诊断和治疗靶点。
方法:作者团队从 Gene Expression Omnibus (GEO) 数据库下载了微阵列数据集 GSE121233 和 GSE129973。数据集包括 25 个 FSGS 样本和 25 个正常样本。使用R包“limma”识别差异表达基因(DEG)。Gene Ontology (GO)功能和(KEGG)通路富集分析使用数据库进行注释,可视化和集成发现 (DAVID),用于识别 DEG 的通路和功能注释。蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)是基于检索相互作用基因(STRING)数据库的搜索工具构建的,并使用 Cytoscape 软件进行可视化。然后使用 Cytoscape 的 cytoHubba 插件评估 DEG 的中心基因。使用 FSGS 大鼠模型通过定量实时聚合酶链反应 (qRT-PCR) 验证中shu基因的表达,并进行接受者操作特征 (ROC) 曲线分析以验证这些中(shu)枢基因的准确性。
结果:在两个 GSE 数据集(GSE121233 和 GSE129973)中共识别出 45 个 DEG,包括 18 个上调和 27 个下调的 DEG。其中,选择了5个具有高度连通性的枢纽基因。在 PPI 网络中,前 5 个中(shu)枢基因中,FN1 上调,而 ALB、EGF、TTR 和 KNG1 下调。 FSGS大鼠的qRT-PCR分析证实FN1的表达上调,EGF和TTR的表达下调。 ROC 分析表明 FN1、EGF 和 TTR 对 FSGS 显示出相当大的诊断效率。
结论:通过生物信息学分析结合实验验证,鉴定出三个新的 FSGS 特异性基因,这可能会促进对 FSGS 的分子基础的理解,并为临床管理提供潜在的治疗靶点。
实验验证中,实验团队应用了柏恒科技荧光定量PCR仪进行样品测定并分析。
除了以上列出的几篇文献,柏恒科技PCR仪在生物科研、动物疫病等方面均有广泛应用,下期我们再继续分享。
文献中PCR仪产品简介
RePure系列智能二维梯度PCR仪
本系列PCR仪具有二维梯度摸索功能,多种梯度摸索模式;
自适应压杆式热盖,合盖紧盖一步到位;
前进后出式风道,机器可并排放置,节约实验空间;
Q3200系列荧光定量PCR仪
本系列荧光PCR仪采用四通道双16孔模块设计,可实现一机多用;
最大升降温速率8℃/s,大大节约实验时间;
体积小,重量轻,方便携带;
更多PCR仪技术应用,欢迎关注柏恒科技,我们提供各类梯度PCR仪、荧光PCR仪等,并为客户提供生物学相关检测解决方案。
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