关于化学的常见物质，常见实验.

　　实验干货—ELISA实验过程中的常见问题解答
 

　　ELISA实验中会遇到很多问题，不是这有点小问题，就是那有点小问题，那该怎么办呢?以下便是天津本生技术小编是我们在多年的实验过程中遇到问题的总结：

　　Q1.标曲不显色或显色很弱，样本显色

　　溶解标准品以及倍比稀释时，未涡旋震荡或不够充分。标准品溶解、倍比稀释时均需要涡旋震荡以充分混匀。单纯依靠移液器反复吹打，效率较低、效果也不一定。

　　Q2.标曲和样本均不显色

　　在孵育阶段静置在桌面上，这样非常不利于抗原抗体之间的充分接触，导致显色偏弱，推荐孵育阶段，使用ELISA用的微孔板振荡器，调至合适的频率，使抗原抗体充分接触，结合效果。如果排除上述原因，有可能是漏加了某个组分，如检测抗体、酶等。对于比较马虎的新手，一定要做好标记和记录，或者使用添加染料的ELISA试剂盒。

　　Q3.标曲显色，样本不显色

　　当样本中目的蛋白浓度低或者样本中干扰因素较强，就无法检测到。目ELISA仍然是蛋白检测灵敏度的方法，与不同技术结合后，衍生出了多种类型的ELISA，提高了检测灵敏度。

　　对于目的蛋白浓度特别低的样本，可以尝高敏ELISA，但这也并不意味着一定能检测到样本浓度，只能说可以提高样本的可测率，并使结果更加可靠。因为通常用普通ELISA检测的样本OD值都偏低，而高敏ELISA可提高样本OD值，使之尽量位于标曲范围内，得到的数值也更加可信。

　　Q4.标曲和样本都显色，但复孔的CV大

　　这个问题就跟移液器和实验者的操作有关了。移液器的使用维护不规范，就会造成移液的误差较大;实验者自身的操作习惯、加样的一致性对复孔的CV也有很大影响。

　　掌握移液器的正确使用和维护。关于个人的操作可练习移液动作、加快速度，确保移液的精密度。

　　Q5.本底偏高，样本值测不到

　　标曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(对于高敏ELISA可以适当放宽要求)。尤其是样本值特别低的时候，本底过高会掩盖目的信号，导致无法测到样本值。

　　在加入TMB显色后，需实时观察标曲显色情况。通常在S5孔有肉眼可见的微弱蓝色，即可终止反应。

　　Q6.样本经不同梯度稀释，计算得到的样本值差异较大

　　有时候我们不清楚样本中目的蛋白的浓度如何，应该如何稀释，那么我们就会做下预实验，确定稀释倍数。然而有时候同一样本做了几个不同梯度稀释后，计算得到的样本值之间差异较大，应该选择哪一个稀释倍数呢?

　　这里涉及到了基质效应。通常血清样本加样量较高时，血清中的各种蛋白会抗原抗体的接触，基质效应较明显。而经过稀释后，干扰因素也随之稀释，影响就会较小。当某两个梯度稀释后，计算得到的样本值接近时，我们就可以认为在该稀释梯度时，样本中的干扰因素影响较小，计算得到的值也是接近真实的。然而这样的稀释是针对目的蛋白浓度较高的样本而言。对于浓度很低的样本，经过多倍稀释后，就更加测不到了，此时可按照厂家说明书推荐的加样方式操作。

　　Q7.不同试剂盒中的组分能否通用

　　除非是公用的试剂如洗液、检测缓冲液，其它组分不建议用其它试剂盒的组分，甚至是同一指标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包括标准品、标准品稀释液、检测抗体、酶等)都是经过优化的，如果贸然使用其它试剂盒的组分，有可能对结果产生影响。

　　ELISA试剂盒本生公司产品种类已超过万种，正广泛应用于科研院校、中心实验室、分子生物学等科研域。公司丰富的产品既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。

问题一：初次使用恒温恒湿试验箱的用户可能会遇到这种情况。测试过程中，湿度突然显示为百分100，但不知道是什么原因造成的？

1、检查湿球纱布是否挂在湿度传感器上。靠近水槽的传感器为湿度传感器，应将纱布挂在湿度传感器上并包裹传感器的感温部分。少数客户经常将纱布挂错地方，挂在温度传感器上，导致机器出现故障。因此，请仔细辨别上一个是温度探测头，靠近水槽的下一个是湿度探测头。

2、如果挂法是正确的，湿度仍显示百分100，请检查湿球纱布是否发黄，或纱布使用时间过长，纱布上堆积了过多矿物质，造成水渍湿球纱布吸水性能下降，不能吸水，使检测的湿度不准确，造成高湿假象；如果是，请更换湿球纱布，如果不是，检查湿球水槽内没有水或水位低，纱布不能吸水，主要检查以下部分：

a、观察水槽旁边的水位箱内是否有水，如果没有，可能是浮子损坏了。

湾电磁泵损坏。用万用表的电压档测量其电阻。如果打开，它会损坏。

c、间隙补给定时器损坏，不能正常补给。

第三步：控制设备设置还是有问题。少数客户对恒温恒湿试验箱的使用存在误区。他们经常将湿度设置为低温，并将湿度设置为 120 摄氏度。在这种情况下也会造成控制设备的不准确和不稳定。低温机不能控制湿度，容易结冰；高温蒸发太快，机器也很难设置湿度。因此，请客户仔细阅读说明书，规范机器操作，延长设备使用寿命。

问题二、恒温恒湿试验箱长期停用怎么办？

如果恒温恒湿试验箱因特殊情况需要停机一段时间，则应采取一些保护措施。具体方法如下：

(1)恒温恒湿试验箱停止使用时，取出物品，拔下电源插头，清洁试验箱内外。

(2)用纸条垫在门封与箱体之间，防止门封粘在箱体上；如果打算长期不使用，也可以在门封上涂一些滑石粉。

(3) 停用后的恒温恒湿试验箱也须放置在干燥通风处，避免阳光直射，位置移动后保持测试盒稳定。（恒温恒湿试验箱的常见疑问）

(4)室内空气有一定的湿度，所以不要用塑料袋盖住试验箱。锡中的水分不易散去，会使金属零件生锈，损坏电器元件的性能。

(5) 恒温恒湿试验箱内用于制冷剂冻结温度很低，不必担心冻结，将试验箱放在温度较高的地方。

(6)如果可能的话，尽量每月通电一次，让压缩机正常运行半小时到一个小时后才关闭。

问题三、湿球纱布在恒温恒湿试验箱中的正确放置方法

在湿热试验中，湿球纱布对恒温恒湿试验箱的湿度感知起着重要的作用。因此，湿球纱布的正确放置和保养须遵循一定的规范和步骤：

1、将湿球纱布从包装盒中取出，剪10cm左右；

2、将湿球纱布下端放入水槽中浸泡（更容易感知湿度），挂在或套在湿度传感器上。

恒温恒湿试验箱湿球纱布的保养和检查： 湿球纱布须挂在上端湿球传感器上，下端放置在湿球纱布槽内，以便于容易吸收水槽中的水分并弄湿。如果湿球纱布安装在其他地方，湿度传感器将无法感应到湿度，造成湿度为百分100的错觉，湿度无法下降，或者湿度根本无法控制。做湿度测试时，一定要检查湿球纱布是否挂好。如果挂了，请检查纱布是否湿了。如有干透或吸水不好，请及时更换湿球纱布。

问题四、恒温恒湿箱在日常工作中如何保养、清洁和保养？

1、恒温恒湿箱内外的清洁保养。

①恒温恒湿试验箱运行前应清理掉内部杂质。

②配电室每年至少清洁一次。清洁时，可以用吸尘器吸走室内灰尘。

③柜体外部也须每年清洁一次以上，清洁时先用肥皂水擦拭。

2、恒温恒湿箱式加湿器的检查与维护。加湿器内的储水器应每月更换一次，以确保水的清洁，加湿器水盘应每月清洁一次，以确保水流顺畅。

3、清理掉恒温恒湿箱冷凝器的灰尘。冷凝器应定期清洁，每月保养一次。使用吸尘器吸出附着在冷凝器散热片上的灰尘或使用高压空气喷洒灰尘。

4、更换恒温恒湿箱内的湿球测试布 测试布表面脏污或变硬时，或温控完成后制作完成后，须更换试布方可继续控制温湿度球度。测试布每三个月更换一次，更换时用干净的布擦拭测温体，更换全新的测试布时应先清洁测温体。

5、检查恒温恒湿箱湿球水位，调节水箱水位不能过高，使水溢出水箱或过低使湿球试验布吸收异常，影响湿球精度。水位大约保持 6 点就足够了。可以调节水箱的水位来调节水箱的高度。

以上就是“关于恒温恒湿试验箱的常见疑问”，武汉金测检测技术有限公司具有CMA与CNAS双重资质认可荣获高新技术企业认证，拥有十余台恒温恒湿箱，4台大型步入室恒温恒湿箱，是做高低温试验、恒温恒湿试验好的检测机构，如您有产品需要做试验，可直接电话联系我们。

　　牛血清实验中常见的问题解析!

　　胎牛血清通常在细胞培养中作为基础生长培养基的添加剂，在细胞培养中，血清供应了丰富的高分子蛋白，低分子量营养物，疏水载体蛋白和其他体外细胞生长必要的成分如激素和粘附因子。同时，胎牛血清可以增加培养基的缓冲能力或中和有毒成分，起到保护细胞的作用。在细胞培养过程中是否选择添加血清，主要根据基础培养基化学成分，培养细胞的类型和培养体系而定。今天天津本生小编给大家分享的是牛血清实验中常见的问题解析!搬起小板凳快来围观吧!

　　血清实验中常见的问题解析：

　　一、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

　　将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

　　长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

　　建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

　　二、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?

　　沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

　　三、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?

　　一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

　　四、 为什么要热灭活血清?

　　加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

　　五、 有必要做热灭活吗?

　　实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

　　而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显着的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。

　　非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

　　六、细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理?

　　一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

　　七、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?

　　来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

　　组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

　　血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。

　　解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

　　牛血清实验中常见的问题解析!我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。