如何提取鱼类DNA

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  辰琉偲 2008-03-13 00:00:00

  为什么不用鱼白呢？更简单

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  77808963 2016-12-01 00:00:00

  以前做过这方面试验，但现在找不到资料 给你个相仿的 原理都一样 实验二 从小鼠肝脏中提取DNA 【目的要求】 1. 掌握DNA分离的原理、各试剂作用及操作过程 2. 掌握肝匀浆制备及注意事项 3. 熟悉DNA浓度、纯度测定原理及方法， 仪器使用 4. 了解分子生物学实验技术(录像) 【教学内容】 1. 从肝中提取DNA 小鼠处死方法， 试剂配制， 离心机使用， 肝匀浆制备， DNA分离纯化原理及注意事项 2. DNA浓度、纯度测定原理及方法，仪器使用 3. (录像带教学) 核酸分离纯化， DNA序列测定， 核酸探针标记与分子杂交 【实验原理】 1．生物组织中DNA是以DNA-蛋白质复合物的形式存在 2．在稀NaCl溶液中，DNA-蛋白质溶解度小，RNA-蛋白质溶解度大; 在浓NaCl溶液中，DNA-蛋白质溶解度大，RNA-蛋白质溶解度小（分开DNA和RNA） 3．SDS（十二烷基硫酸钠），使蛋白质变性（分开DNA和蛋白质） （1）SDS是一种阴离子表面活性剂，能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质的疏水部位; （2）SDS可引起蛋白质构象改变 （3）SDS是一种良好的解离剂，可使蛋白质溶解，变性 （4）形成SDS-蛋白质复合物，并使复合物带负电 4．氯仿-异丙醇可以将蛋白质除去 5．适量的冷无水乙醇可使DNA析出。 6．防止DNA酶解的办法——加入EDTA - 2Na（乙二胺四乙酸二钠） 7．检查DNA纯度：A260/A280 （1） A260/A280 ＝1.8，高纯度DNA （2） A260/A280 < 1.8，含蛋白质 （3） A260/A280 > 1.8，含RNA 【试剂】 (1) 0.14M NaCl，0.1M EDTA (2) 5M NaCl (3) 30% SDS (4) 氯仿-异丙醇 (5) 0.015M NaCl-0.0015M柠檬酸钠 (6) 冷无水乙醇 【步骤】 一．提取脱氧核糖核蛋白 1.杀鼠取肝3克（2—3只小鼠），15ml 0.14M NaCl，0.1M EDTA洗去血液 2.肝匀浆制备 （1）乳钵中剪碎 （2）15ml 0.14M NaCl，0.1M EDTA （3）不要用力研磨 3.离心3000rpm 10分钟，弃上清 沉淀加入0.14M NaCl，0.1M EDTA 15ml轻轻悬起 离心 3000rpm 10分钟，弃上清 沉淀加入0.14M NaCl，0.1M EDTA 10ml 使之溶解，转至50毫升三角烧瓶中 二．除蛋白质 1.加入30% SDS 1ml 混匀，60℃水浴轻摇15分钟，取出冷至室温 2. 5M NaCl 2.75ml， 轻摇10分钟 3.氯仿-异丙醇19ml（沉淀蛋白），轻摇20分钟，离心 2500rpm 10分 三．粗提DNA 1. 吸上清（水相）转入玻璃离心管（含DNA）， 弃沉淀（剩余物） 2. 加入1.5倍体积冰乙醇（无水乙醇）轻摇至DNA析出 四． 检测 1．用镊子或玻璃棒取出置试管中，加入0.015M NaCl-0.0015M柠檬酸钠1毫升 2．稀释适当倍数：量取10-50μl (用0.1ml刻度吸管吸取) 原液，用0.015M NaCl-0.0015 M柠檬酸钠稀释到5ml（稀释100-500倍） 3．测A260/A280（用0.015M NaCl-0.0015M柠檬酸钠做空白溶液） 五．计算 1.DNA浓度：（μg/ml）=A260×50×稀释倍数 2.DNA纯度：A260/A280 【注意事项】 1. 研磨时上下用力，尽量避免DNA链断裂。 2．加入氯仿—异丙醇后勿剧烈摇动，以免大分子断裂。 3．有机溶剂对人体有害，操作时要注意。

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  Fiend丶影 2016-08-01 00:00:00

  【步骤】 一．提取脱氧核糖核蛋白 1.杀鼠取肝3克（2—3只小鼠），15ml 0.14M NaCl，0.1M EDTA洗去血液 2.肝匀浆制备 （1）乳钵中剪碎 （2）15ml 0.14M NaCl，0.1M EDTA （3）不要用力研磨 3.离心3000rpm 10分钟，弃上清 沉淀加入0.14M NaCl，0.1M EDTA 15ml轻轻悬起 离心 3000rpm 10分钟，弃上清 沉淀加入0.14M NaCl，0.1M EDTA 10ml 使之溶解，转至50毫升三角烧瓶中 二．除蛋白质 1.加入30% SDS 1ml 混匀，60℃水浴轻摇15分钟，取出冷至室温 2. 5M NaCl 2.75ml， 轻摇10分钟 3.氯仿-异丙醇19ml（沉淀蛋白），轻摇20分钟，离心 2500rpm 10分 三．粗提DNA 1. 吸上清（水相）转入玻璃离心管（含DNA）， 弃沉淀（剩余物） 2. 加入1.5倍体积冰乙醇（无水乙醇）轻摇至DNA析出 四． 检测 1．用镊子或玻璃棒取出置试管中，加入0.015M NaCl-0.0015M柠檬酸钠1毫升 2．稀释适当倍数：量取10-50μl (用0.1ml刻度吸管吸取) 原液，用0.015M NaCl-0.0015 M柠檬酸钠稀释到5ml（稀释100-500倍） 3．测A260/A280（用0.015M NaCl-0.0015M柠檬酸钠做空白溶液） 五．计算 1.DNA浓度：（μg/ml）=A260×50×稀释倍数 2.DNA纯度：A260/A280 【注意事项】 1. 研磨时上下用力，尽量避免DNA链断裂。 2．加入氯仿—异丙醇后勿剧烈摇动，以免大分子断裂。 3．有机溶剂对人体有害，操作时要注意。

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