河鲀毒素的检测方法

黄曲霉毒素(aflatoxins)是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物，其结构通常包含一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮，天然产生的黄曲霉毒素根据其化学结构不同分为B₁、B₂、G₁ 、G₂四种。

食品遭受产毒真菌以及霉菌毒素污染的问题在世界范围内反复发生，被污染的农作物作为饲料资源被畜禽食用后， 携带的霉菌毒素又可在肉、蛋、奶等食品中蓄积，通过食物链传递， 危害人类健康。

逗点生物采用最新自主研发的Copure®228多功能净化柱，建立玉米粉中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂检测的LC-MS/MS检测方法。该方法低、中、高三个水平的加标回收率均在90-100 %之间，RSD小于5 %，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有回收率高和脱色净化效果好的优势，能够作为玉米粉中黄曲霉毒素检测的参考方法。

本方法适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的测定。

参照 《GB 5009.22-2016  食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》。

一、样品前处理

1.1  样品提取

（1）称取 5 g试样于50 mL离心管中，加入一定量同位素内标工作液振荡混合后静置30 min。

（2）加入20 mL乙腈-水溶液（84+16），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20 min，在6000 r/min下离心10 min，取上清液备用。

1.2  样品净化

（1）向玻璃试管中加入10 mL样品提取液。

（2）将Copure® 228多功能净化柱（货号：COAF228）橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端。

（3）将净化柱上部净化后的样品提取液取出至样品瓶或EP管中。

（4）取5 mL净化提取液，氮气吹干，用1 mL初始流动相复溶，涡旋 30s 溶解残渣，过微孔滤膜，上机分析。

二、仪器条件

仪器设备：液相色谱-串联质谱联用仪 SCIEX Triple Quad™ 4500 

色谱柱：Waters C18   2.1x100mm 1.7um

流动相：A：0.1%甲酸水    B：乙腈

流动相梯度：初始80%A，20%A（0 min~2 min），20%A（2 min~3 min），

80%A（3 min~3.1min），80%A（3.1min~5min）

流速：0.3 mL/min

柱温：室温

进样体积：10.0 μL

质谱条件：

检测方式：多离子反应检测（MRM）；

表1 离子源控制条件

表2 离子选择参数

（注：*为定量离子）

三、实验结果

表3  玉米粉中黄曲霉毒素加标回收实验结果

图1 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的脱色效果图（①玉米粉加标样品-未净化处理    ②Copure®228-净化处理    ③ 国外A品牌-净化处理     ④ 国内B品牌-净化处理）

Copure®228脱色效果明显，其脱色能力与国外A品牌相当，并显著优于国内B品牌。

图2 使用Copure®228净化后的加标样品的EIC色谱图

四、订购信息

2020版药典中新增多种中药材的黄曲霉毒素检测，并给出限量要求。

快检技术的应用满足了中药材快速高效检测的要求，并且极大降低了检测成本，在毒素检测领域广泛应用。

一、胶体金检测试纸条法

胶体金检测试纸条法分为两种：定性试纸条和快速定量试纸条，适用于中药材快速初筛及原料验收等阶段的真菌毒素检测。

1.Pribolab定量检测试纸条

（1）适用项目：黄曲霉毒素B1

（2）产品优势：

15分钟获得检测报告

每一味药材经过独立验证，适用性强

独特的处理方法，去除多种活性成分及杂质干扰

与药典方法比对，实现高度准确性

无需温育反应，方便快捷

（3）产品使用：

定量检测需配备Pribolab专用多功能定量检测仪进行读数。标准曲线IC卡已配置好，无需手动输入标准数据，需要注意的是上机读值前务必先使用同批次随附曲线卡（试纸条包装盒盖内侧粘贴曲线卡）中标准曲线数值，不同批次不可混用。

Pribolab定性检测试纸条

适用项目：黄曲霉毒素B1/总量

（2）产品优势：

快速筛选，仅需十分钟；

适合现成检测，结果可肉眼直接判读；

性价比高，结果准确可靠；

（3）实验过程：

（4）结果判定：

（5）中药试纸条检测产品及配套仪器：

二、酶联免疫试剂盒

(1) 适用项目：黄曲霉毒素B1

中药专用试剂盒是根据《2020版-2351真菌毒素测定法》独立开发的产品，它适用于药典中黄曲霉毒素ELISA检测方法。

(2)产品优势：

1小时内获得检测报告

实现定量检测，对比限量要求

独特的处理方法，去除多种活性成分及杂质干扰

与药典方法比对，范围广，更便捷

检测效率提升2倍

（3）酶联免疫试剂盒产品及配套仪器：

现行使用的2020年版药典中，对于黄曲霉毒素的检测有明确要求，现检测品种由2015年药典要求的19种中药材增加到25种中药材原料，及用这些原料制成的饮片、丸剂等成品药，现有2020年版药典中对于黄曲霉的检测方法有三种，第一种是高效液相色谱法+光化学衍生法；第二种是高效液相色谱-串联质谱法；第三种是酶联免疫法。现在大部分药检所机构及中药企业实验室基本采用第一种方法居多，不管是从检测复杂程度、设备成本、耗材成本多方面考虑，第一法都有一定的优势。我们公司可以提供第一法的解决方案，并给国内100+中药企业提供过解决方案，如需要解决方案的可与我们沟通联系。

现行药典方法都是化验室用来定量检测的，从样品前处理到得到结果，最快也需要3小时以上，而这是样品已经入库，对于黄曲霉风险比较高的样品，例如酸枣仁、柏子仁、远志等中药材，如果已经入库后，且黄曲霉超标，该样品将无法进入到生产环节，这样对于企业的经济损失将是非常大的，那就急需要一种能现场快速检测黄曲霉的设备，并且结果有保证的检测方法。

中检维康生物公司提供一套现场快速检测中药材黄曲霉的方案，基于胶体金免疫层析快速检测技术（GICA）通过图像分析技术定量快速检测中药材中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素总量、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮，以及赭曲霉毒素A等真菌毒素的含量。

微囊藻毒素LR试剂盒(MC-LR)ELISA检测试剂盒本生生物公司供应：ELISA试剂盒,分光光度计，血清，荧光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量离心管，进口冻存管，细胞培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，色谱耗材，针头过滤器。
货号：BS-4964
中文名称：微囊藻毒素LR(MC-LR)ELISA试剂盒
规格：96T/48T
保存条件及有效期：
1、试剂盒保存：2-8℃。
2、有效期：6个月.
检测种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭、猴ELISA试剂盒等种属。
微囊藻毒素LR试剂盒(MC-LR)ELISA检测试剂盒试剂盒组成：
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 ; 2 酶标试剂 6ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 ; 4 样品稀释液 6ml×1 瓶
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 ; 6 显色剂B 液 6ml×1/瓶
7 终止液 6ml×1 瓶; 8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶
9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶; 10 说明书 1 份
11 封板膜 2 张; 12 密封袋 1 个
微囊藻毒素LR试剂盒(MC-LR)ELISA检测试剂盒