ao/pi双色荧光染色的细胞还能正常生长吗

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  815746866 2016-05-09 00:00:00

  很荣幸能为你解答！ 实验、叶绿体的分离与荧光观察 实 验 目 的 1 通过植物细胞叶绿体的分离， 了解细胞器分离的一般原理和方法。 2 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光， 并熟悉荧光显微镜的使用方法。 实 验 原 理 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液(035molL氯化钠或04molL蔗糖溶液)中进行， 以免渗透压的改变使叶绿体到损伤。将匀浆液1000rmin的条件下离心2min， 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后，在3000rmin的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程Z好在0~5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。 利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间， 有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时Z好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。 实 验 用 品 一、器材 1主要设备: 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。 2小型器材: 500ml烧杯2个， 250ml量筒1个， 滴管20支， 10ml刻度离心管20支， 试管架5个，纱布若干，无荧光载片和盖片各4片。 二、材料 新鲜菠菜。 三、试剂 035molL氯化钠溶液，001%吖啶橙(acridine orange)。 实 验 方 法 一、叶绿体的分离与观察 1 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 035molL NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2 利用组织捣碎机低速(5000rmin)匀桨3~5min。 3 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4 取滤液4ml在1000rmin下离心2min。弃去沉淀。 5 将上清液在3000rmin下离心5min。弃去上清液，沉淀即不叶绿体(混有部分细胞核)。 6 将沉淀用035molLNaCl溶液悬浮、 7 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。 (3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴001%吖啶橙荧光染料， 加盖片后即可在荧光显微镜下观察。 二、菠菜叶手切片观察 用剔须刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面置于载玻片上，滴加1~2滴035molL NaCl溶液，加盖片后轻压，置显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。 (3) 观察间接荧光：向手切片上滴加1～2滴001%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液， 加盖片后可在荧光显微镜下观察间接荧光。 实 验 结 果 一、叶绿体的分离和观察 1 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。 2 以Olympus荧光显微镜为例，在先用B(bule)激发滤片、B双色镜和O530(orange)阴断滤片的条件下，叶绿体发出火红色荧光。 3 加入吖啶橙染色后，叶绿体可发出桔红色荧光，而其中混有的细胞核则发绿色荧光。 二、菠菜叶手切片观察 1 在普通光镜下可以看到三种细胞 (1)表皮细胞: 为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞; (2)保卫细胞: 为构成气孔的成对存在的肾形细胞；(3)叶肉细胞: 为排列成栅状的长形和椭圆形细胞。叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。 2 在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光，但其荧光强度要比游离叶绿体弱， 气孔发绿色荧光，两保卫细胞内的火红色叶绿体则环绕气孔排列成一圈。表皮细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。 3 用吖啶橙染色后，叶绿体则发出桔红色荧光，细胞核可发出绿色荧光， 气孔仍为绿色。 作 业 1 在普通光学显微镜下，用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴，分别测量5~10个叶绿体，求其平均值。 2 在荧光显微镜下，观察叶绿体的自发荧光时，更换滤镜系统，叶绿体的颜色是否有变化？ 实验五、 植物染色体标本制备与观察 实验目的 学习植物染色体标本的制备技术，了解Feulgen反应的基本原理，学习其操作方法和压片法，初步掌握细胞分裂各期的主要特点 核酸是生物Z重要的组成成分，核酸分为两大类，即脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)它们在细胞内的分布及化学性

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